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目的观察H2O2诱导原代培养SD大鼠视网膜细胞凋亡过程中细胞内Ca2＋浓度（[Ca2＋]i）的变化及其来源。方法取1-3d内新生SD大鼠视网膜进行原代细胞培养,以100μmol/L H2O2作用0、2、4、8、12、24h,采用MTT法进行细胞活力检测,应用Hoechst 33342染色法进行细胞凋亡检测,以Fluo-3AM为细胞内Ca2＋探针并利用荧光激活细胞分类技术（FACS）进行[Ca2＋]i检测,确定H2O2诱导细胞损伤及凋亡过程中[Ca2＋]i的变化;应用细胞外Ca2＋螯合剂EGTA初步检测H2O2诱导的[Ca2＋]i变化是否源于细胞外Ca2＋内流。结果 100μmol/L H2O2可诱导原代培养的SD大鼠视网膜细胞发生凋亡,且凋亡数目呈时间依赖性递增;100μmol/L H2O2作用2-24h均可显著降低细胞活力,而[Ca2＋]i的升高出现在H2O2作用2h且维持至12h,然后逐渐下降,至24h恢复至正常水平;0.5-5mmol/L EGTA可显著削弱由100μmol/L H2O2作用2h导致的[Ca2＋]i增加。结论在H2O2诱导原代培养的SD大鼠视网膜细胞发生凋亡过程中,[Ca2＋]i的升高发生在凋亡的早期阶段,而非细胞凋亡全过程中;H2O2的损伤作用所导致的[Ca2＋]i升高部分来源于细胞外Ca2＋的内流。

目的探讨大鼠视神经钳夹伤致视网膜细胞凋亡过程中活性氧（reactiveoxygenspeciesin，ROS）的含量和依达拉奉（edaravone，MCI-186）对视网膜细胞的保护作用。方法SD大鼠t92只，雌雄各半，随机分为正常组、假手术组、对照组、治疗组，每组各48只。对照组、治疗组用视神经钳夹法制作大鼠视神经夹挫伤模型；治疗组造模后腹腔注射依达拉奉30mg／kg，用生理盐水稀释后每隔12h腹腔注射给药。给药时间为30rain，共14d。于实验的3、6、10、14d处死大鼠。2′，7′-二氯双氢荧光素双乙酸酯（DCFH-DA）为标记探针，通过流式细胞术定量检测各组不同时间点视网膜细胞内2′，7′-二氯双氢荧光素（DCF）的荧光强度；以AnnexinV／PI双染色法通过流式细胞术定量检测各组不同时间点视网膜细胞凋亡率；激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡的形态特征；透射电镜观察各组鼠视网膜神经节细胞（retinalganglioncells，RGCs）的超微结构改变。结果造模后3～14d，视网膜细胞中活性氧的表达量和细胞总凋亡率在3、6、10、14d时每个时间点对照组较治疗组和正常组明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05），假手术与正常组间相比均无显著性差异。透射电镜检查显示：治疗组大鼠RGCs细胞核、染色质、细胞器损伤较对照组有明显减轻。结论依达拉奉通过清除ROS，阻止了RGCs凋亡，具有一定的视网膜细胞保护作用。

目的探讨绿原酸（CHA）对体外培养人视网膜母细胞瘤（Rb）细胞株HXO-RB44的作用及机制。方法应用CCK-8体外抑制实验,筛选CHA对体外培养传6代的人Rb细胞株HXO-RB44的最佳抑癌浓度。Western blot检测人Rb细胞株HXO-RB44中抑癌基因Rb1和P16及细胞周期蛋白（Cyclin D2）和细胞周期蛋白依赖激酶（CDK 4）的表达变化;ELISA检测培养基中乳酸脱氢酶（LDH）水平。结果 CCK-8体外抑制实验结果显示,CHA对人Rb细胞株HXO-RB44的最佳抑癌浓度为80μmol/L。经80μmol/L CHA处理5d的HXO-RB44细胞株中,抑癌基因Rb1和P16均有少量表达,而在阳性对照组（HT1080细胞）和未处理的HXO-RB44细胞几乎没有表达。CHA处理5d的HXO-RB44细胞株的Cyclin D2和CDK4的表达明显低于阳性对照组（HT1080细胞）和未处理的HXO-RB44细胞（P〈0.01）。CHA处理5d的HXO-RB44的培养基中LDH的含量为（226.75±42.74）U/L,明显低于正常培养的细胞培养基（425.84±31.67）U/L（P〈0.01）。结论 80μmol/L CHA可能通过增加HXO-RB44抑癌基因的表达,降低细胞周期蛋白的表达及LDH水平,而抑制HXO-RB44细胞株的增殖。

目的探讨p130蛋白和mRNA在子宫乳头状浆液性癌（UPSC）中的表达及其临床病理意义。方法收集10例Ⅰ期UPSC患者标本作为UPSC组,10例相同分期高级别子宫内膜癌作为病例对照组,另取相同年龄10例正常增生期子宫内膜标本作为正常对照组。采用HE染色、光镜观察和免疫组织化学方法检测p130蛋白表达水平,实时定量RT-PCR方法检测p130mRNA表达水平,结合临床随访资料进行临床病理分析。结果 UPSC组p130蛋白和mRNA表达（分别为0.46±0.01、0.56±0.06）均明显低于正常增生期子宫内膜（分别为0.91±0.04、2.81±0.40,P〈0.01）和高级别子宫内膜癌（分别为0.55±0.03、0.64±0.03,P〈0.05）。临床病理分析显示,患者均为绝经后女性,症状均为绝经后阴道不规则出血,肿瘤中位大小7.5cm（1.2～14.8cm）,病理学特征与卵巢高级别乳头状浆液性癌相似。结论 UPSC中p130蛋白和mRNA表达减少,可能与UPSC患者预后较差有关。

目的研究藏红花素通过影响Ca^2＋内流对谷氨酸盐诱导的视网膜神经节细胞（RGCs）凋亡的影响及可能机制。方法分离大鼠RGCs,以0.1、1mmol/L的谷氨酸盐刺激RGCs 24、48h,建立RGCs凋亡模型,并用0.1、1.0、3.0μmol/L浓度梯度藏红花素分别处理。Annexin V-FITC/PI双标检测细胞凋亡率,Fluo-3/AM荧光标记Ca^2＋检测胞内钙离子浓度,Western blot检测藏红花素对胞内钙离子介导的凋亡信号分子calpain和CaMKⅡ表达的影响。JC-1荧光染色和Western blot分别检测藏红花素对线粒体膜电位和线粒体凋亡相关信号分子Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2/Bax表达的影响。结果 0.1mmol/L谷氨酸盐刺激24h,RGCs细胞凋亡率与对照组差异无统计学意义（P〉0.05）;而当刺激48h时,RGCs的凋亡率达到（43.050±2.616）%,差异有统计学意义（P〈0.01）。高剂量谷氨酸盐（1mmol/L）刺激24、48h的RGCs凋亡率为（46.450±1.061）%和（45.500±3.253）%,较对照组均显著增加,差异有统计学意义（P〈0.01）。用1mmol/L谷氨酸盐刺激RGCs 12h后加入0.1、1.0、3.0μmol/L藏红花素再处理12h,不同浓度藏红花素均可显著抑制细胞凋亡（P〈0.01）,且抑制效率具有剂量依赖性。另外,1.0μmol/L藏红花素组的谷氨酸盐诱导的胞外Ca^2＋内流减少及钙依赖蛋白Calpain1和CaMKⅡ的表达减弱,线粒体膜电位增高,Caspase-3和Caspase-9的表达减少,Bcl-2/Bax表达上调。结论藏红花素抑制谷氨酸盐诱导的RGCs凋亡,其机制可能与阻止胞外Ca^2＋内流,抑制钙依赖的凋亡信号通路和线粒体凋亡信号通路有关。

目的 观察重组人结缔组织生长因子（rhCTGF）对视网膜色素上皮（RPE）细胞增生和黏附的影响。方法 用CTGF蛋白、多聚赖氨酸（PLL）和胶原分别包被培养板，观察CTGF促进RPE细胞黏附的作用；用四唑盐（MTT）比色试验和流式细胞仪（FCM）测定RPE细胞增生反应。结果 10-30mg／L的CTGF蛋白提高RPE细胞的贴壁黏附能力，与未包被的对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）；30mg／LCTGF促进RPE细胞黏附的能力与0．1g／L胶原的作用一致，但略低于0．1g／L PLL的作用。MTT实验显示CTGF刺激RPE细胞生长，CTGF作用24h刺激RPE细胞增生的能力最强。FCM测定细胞周期结果显示S期百分比随着CTGF浓度增加而逐渐增加，无血清培养的对照组S期百分比为（7．5±0．4）％，60μg／LCTGF刺激24h后，S期百分比上升至（16．1±2．0）％。结论 CTGF可以促进RPE细胞的黏附和增生，在增生性玻璃体视网膜病变等眼内增生性疾病中可能有重要意义。

目的探讨依达拉奉（edaravone）对小鼠视网膜急性光损伤（retinalphotodamage，RP）的保护作用。方法将42只成年雄性BAI．B／c小鼠随机分为正常对照组（C组，n=6）和实验组（K=36），后者再分为光损伤组（L组）、edaravone组（E组）、生理盐水组（NS组），其中E组和NS组是同一只动物的不同眼别，即右眼注射edaravone，左眼注射生理盐水。实验组采用（8000±300）lux白色荧光连续照射4h建立小鼠RP模型，于光照后暗修复0、24、72h时取材，视网膜组织切片HE染色观察视网膜形态及外核层（outernuclearlayer，ONL）厚度，免疫组织化学法染色检测原癌基因c—Fos、半胱天冬酶-1（Caspase—1）蛋白的表达变化，以此评价edaravone对RP的保护作用。结果与对照组相比，实验组视网膜ONL厚度均随光照后暗修复时间延长而变薄，E组与I．组、NS组同一时间点比较，视网膜ONI，变薄程度明显减轻（P〈0．05）。实验组于暗修复0h即可在视网膜ONI．检测到c—Fos、Caspase一1蛋白表达，二者表达高峰分别位于暗修复0、24h（P〈0．05）；同一时间点，E组视网膜c—Fos、Caspase～l蛋白表达较L组和NS组均明显降低（P〈0．05）。结论RP可引起视网膜ONL变薄，c—Fos、Caspase—l蛋白表达增加，edaravone通过抑制二者表达间接对RP起到保护作用。

目的检测增生性糖尿病视网膜病变（PDR）患者纤维血管膜标本中血管内皮祖细胞和血管内皮生长因子（VEGF）的表达，探讨二者与PDR发生发展的关系及相互作用。方法收集10例玻璃体手术中剥除的PDR膜，以10例增生性玻璃体视网膜病变（PVR）膜及1例人视网膜为对照，进行组织形态学观察，免疫组织化学染色检测血管内皮祖细胞数及VEGF的表达，并进行统计学分析。结果PDR膜包括中央部无血管区，间有少量细胞的纤维组织区和周边部富细胞区，PVR膜则为排列不规则的细胞散在分布于细胞外间质。10例PDR膜中均发现血管内皮祖细胞（5．90±1．83）个，而10例PVR膜中仅有1例发现血管内皮祖细胞（0．10±0．32）个，人视网膜未见血管内皮祖细胞。PDR膜VEGF表达明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．001），且PDR膜中血管内皮祖细胞数与VEGF的表达呈现正相关性。结论血管内皮祖细胞与VEGF均参与了PDR新生血管的形成，二者可能具有协同作用。

目的比较SD、E3与DA1U大鼠视网膜光损伤敏感性,为构建不同品系大鼠视网膜光损伤模型和研究眼底色素抗光损伤保护视网膜的相关机制研究提供实验依据。方法成年SD、E3、DA1U大鼠,雌雄随机选取,采用视网膜电图与HE染色分别检测正常情况下与光损伤后不同品系大鼠视网膜感光功能与组织形态变化,采用TUNEL染色观察光损伤后视网膜凋亡细胞的分布与数量。结果正常状态下,SD大鼠色素上皮层、脉络膜层及E3大鼠色素上皮层均无色素分布,而E3大鼠脉络膜层、DA1U大鼠色素上皮层与脉络膜层有褐色色素分布;HE结果显示,在正常状态下,3种品系大鼠视网膜外核层厚度没有显著差异,而在光损伤条件下,SD大鼠视网膜各层细胞均严重受损;视网膜电图结果显示,在正常状态下,不同品系大鼠间视网膜电图视杆细胞反应b波振幅存在显著差异,E3大鼠最大混合反应a波及b波振幅与SD大鼠相比有显著差异,而在光损伤条件下,与SD大鼠相比,E3和DA1U大鼠视网膜电图a波与b波的波幅降幅显著减弱;TUNEL染色结果显示,与SD大鼠相比,E3与DA1U大鼠视网膜内核层及外核层凋亡细胞分布范围与数量均显著下降。结论 SD、E3与DA1U大鼠间存在视网膜色素分布与光...

目的探讨在糖尿病大鼠的视网膜组织中，视网膜血管内皮生长因子（VEGF）通过激活蛋白激酶C（PKC），上调一氧化氮（N0）含量，促使细胞间黏附因子-1（ICAM-1）升高的信号机制。方法腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立糖尿病大鼠模型。设立正常组、糖尿病组、糖尿病大鼠PKC抑制剂组、二甲基亚砜对照组。应用硝酸还原酶法检测视网膜组织中N0含量，应用Western-blot检测VEGF及ICAM-1蛋白含量。结果在糖尿病大鼠视网膜中VEGF、NO含量较正常大鼠明显升高（P〈0．05）。应用PKC抑制剂24h，视网膜组织中VEGF、NO含量明显下降，与二甲基亚砜对照组相比有显著差异（P〈0．05）。ICAM-1含量也呈现出相应的变化趋势，糖尿病大鼠视网膜中的ICAM-1较正常大鼠显著增高（P〈0．01）。而应用PKC抑制剂24h，ICAM-1的表达明显低于二甲基亚砜对照组（P〈0．01）。VEGF、NO、ICAM-1的含量在二甲基亚砜对照组与糖尿病组之间的差异无统计学意义。结论链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠视网膜病变中ICAM-1蛋白表达升高，可能是通过VEGF／PKC／NO这一信号通路完成的。