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R594.12; 目的 探讨热休克蛋白27(HSP27)在热打击(HS)致F98细胞氧化应激损伤及细胞凋亡中的作用.方法 以43℃热刺激60min建立F98细胞热打击模型,在热打击后的不同时间点(0、3、6、9、12h)收集细胞,Western blotting检测HSP27及其各丝氨酸位点的磷酸化水平;采用丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)通路抑制剂(SB203580、SP600125、PD98059)及腺病毒转染特异性抑制相关信号通路,探索F98细胞HSP27的信号调节途径;继而通过磷酸化位点抑制性突变腺病毒转染观察HSP27各位点磷酸化对F98细胞活力、活性氧(ROS)及凋亡水平等的影响.结果 给予热打击后,F98细胞HSP27在复温早期即轻度升高,其3个丝氨酸位点(Ser15,Ser78,Ser82)均发生磷酸化,以Ser78位点磷酸化为主.经MAPKs抑制剂预处理后,HS+SB203580组HSP27的3个位点磷酸化水平较对照组明显下降(P<0.05);MAPK激活蛋白激酶2(MK2)特异性抑制剂2'-氟-N-(4-羟基苯基)-[1,1'-联苯]-4-丁酰胺(CMPD-1)及腺病毒Ad-MK2(A)的干预,使HSP27丝氨酸位点磷酸化水平较HS组明显降低(P<0.05).将F98细胞分别转染HSP27磷酸化位点的抑制性突变腺病毒后,与HS组比较,Ad-Ser78-HSP27组细胞活力增强,ROS水平、Caspase-3活性及细胞凋亡率下降(P<0.05);而AdSer15-HSP27、AdSer82-HSP27组与HS组比较无明显差异(P>0.05).结论 p38 MAPK/MK2途径主要通过磷酸化HSP27的Ser78位点上调ROS,促进F98细胞凋亡.

目的观察H2O2诱导原代培养SD大鼠视网膜细胞凋亡过程中细胞内Ca2＋浓度（[Ca2＋]i）的变化及其来源。方法取1-3d内新生SD大鼠视网膜进行原代细胞培养,以100μmol/L H2O2作用0、2、4、8、12、24h,采用MTT法进行细胞活力检测,应用Hoechst 33342染色法进行细胞凋亡检测,以Fluo-3AM为细胞内Ca2＋探针并利用荧光激活细胞分类技术（FACS）进行[Ca2＋]i检测,确定H2O2诱导细胞损伤及凋亡过程中[Ca2＋]i的变化;应用细胞外Ca2＋螯合剂EGTA初步检测H2O2诱导的[Ca2＋]i变化是否源于细胞外Ca2＋内流。结果 100μmol/L H2O2可诱导原代培养的SD大鼠视网膜细胞发生凋亡,且凋亡数目呈时间依赖性递增;100μmol/L H2O2作用2-24h均可显著降低细胞活力,而[Ca2＋]i的升高出现在H2O2作用2h且维持至12h,然后逐渐下降,至24h恢复至正常水平;0.5-5mmol/L EGTA可显著削弱由100μmol/L H2O2作用2h导致的[Ca2＋]i增加。结论在H2O2诱导原代培养的SD大鼠视网膜细胞发生凋亡过程中,[Ca2＋]i的升高发生在凋亡的早期阶段,而非细胞凋亡全过程中;H2O2的损伤作用所导致的[Ca2＋]i升高部分来源于细胞外Ca2＋的内流。

R774.1; 目的 观察H2O2诱导原代培养SD大鼠视网膜细胞凋亡过程中细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化及其来源.方法 取1～3 d内新生SD大鼠视网膜进行原代细胞培养,以100 μmol/L H2O2作用0、2、4、8、12、24h,采用MTT法进行细胞活力检测,应用Hoechst 33342染色法进行细胞凋亡检测,以Fluo-3 AM为细胞内Ca2+探针并利用荧光激活细胞分类技术(FACS)进行[Ca2+]i检测,确定H2 O2诱导细胞损伤及凋亡过程中[Ca2+]i的变化;应用细胞外Ca2+螯合剂EGTA初步检测H2 O2诱导的[Ca2+]i变化是否源于细胞外Ca2+内流.结果 100 μmol/L H2O2可诱导原代培养的SD大鼠视网膜细胞发生凋亡,且凋亡数目呈时间依赖性递增;100 μmol/L H2O2作用2～24 h均可显著降低细胞活力,而[Ca2+]i的升高出现在H2 O2作用2h且维持至12h,然后逐渐下降,至24 h恢复至正常水平;0.5～5mmol/L EGTA可显著削弱由100 μmol/L H2O2作用2h导致的[Ca2+]i增加.结论 在H2O2诱导原代培养的SD大鼠视网膜细胞发生凋亡过程中,[Ca2+]i的升高发生在凋亡的早期阶段,而非细胞凋亡全过程中;H2O2的损伤作用所导致的[Ca2+]i升高部分来源于细胞外Ca2+的内流.

目的用流式细胞技术（FACS）检测H2O2诱导的视网膜神经细胞凋亡以及17β-雌二醇（βE2）对细胞的保护作用。方法取新生24 h内的SD大鼠进行视网膜神经细胞的原代培养,待细胞培养4-5 d,经不同因素处理后,用MTT法检测细胞存活率,用FACS法检测细胞凋亡率。结果200μmol/L的H2O2能有效诱导视网膜神经细胞凋亡;低浓度的H2O2不能诱导细胞凋亡,但高浓度的H2O2诱导细胞凋亡的同时也导致了正常细胞比率的锐减;10μmol/L的βE2能有效对抗H2O2诱导的视网膜神经细胞凋亡;低浓度的βE2对细胞未表现出保护作用,高浓度的βE2对细胞反而表现出毒性作用。结论一定浓度的βE2在一定范围内能对抗H2O2诱导的视网膜神经细胞凋亡,表现对神经细胞保护的作用。

目的比较SD、E3与DA1U大鼠视网膜光损伤敏感性,为构建不同品系大鼠视网膜光损伤模型和研究眼底色素抗光损伤保护视网膜的相关机制研究提供实验依据。方法成年SD、E3、DA1U大鼠,雌雄随机选取,采用视网膜电图与HE染色分别检测正常情况下与光损伤后不同品系大鼠视网膜感光功能与组织形态变化,采用TUNEL染色观察光损伤后视网膜凋亡细胞的分布与数量。结果正常状态下,SD大鼠色素上皮层、脉络膜层及E3大鼠色素上皮层均无色素分布,而E3大鼠脉络膜层、DA1U大鼠色素上皮层与脉络膜层有褐色色素分布;HE结果显示,在正常状态下,3种品系大鼠视网膜外核层厚度没有显著差异,而在光损伤条件下,SD大鼠视网膜各层细胞均严重受损;视网膜电图结果显示,在正常状态下,不同品系大鼠间视网膜电图视杆细胞反应b波振幅存在显著差异,E3大鼠最大混合反应a波及b波振幅与SD大鼠相比有显著差异,而在光损伤条件下,与SD大鼠相比,E3和DA1U大鼠视网膜电图a波与b波的波幅降幅显著减弱;TUNEL染色结果显示,与SD大鼠相比,E3与DA1U大鼠视网膜内核层及外核层凋亡细胞分布范围与数量均显著下降。结论 SD、E3与DA1U大鼠间存在视网膜色素分布与光...

目的 用流式细胞技术(FACS)检测H2O2诱导的视网膜神经细胞凋亡以及17β-雌二醇(βE2)对细胞的保护作用.方法 取新生24 h内的SD大鼠进行视网膜神经细胞的原代培养,待细胞培养4-5 d,经不同因素处理后,用MTT法检测细胞存活率,用FACS法检测细胞凋亡率.结果 200 μmol/L的H2O2能有效诱导视网膜神经细胞凋亡;低浓度的H2O2不能诱导细胞凋亡,但高浓度的H2O2诱导细胞凋亡的同时也导致了正常细胞比率的锐减;10 μmol/L的βE2能有效对抗H2O2诱导的视网膜神经细胞凋亡;低浓度的βE2对细胞未表现出保护作用,高浓度的βE2对细胞反而表现出毒性作用.结论 一定浓度的βE2在一定范围内能对抗H2O2诱导的视网膜神经细胞凋亡,表现对神经细胞保护的作用.