Explore the vast range of titles available.

Reliable automated blood cell characterization and quantification remain challenging in pathologic samples, whereas slide reviews due to unnecessary flagging should be avoided. We compared 4 modern hematology analyzers—Abbott Sapphire, Siemens Advia 120, Sysmex XE-2100, and Beckman Coulter DxH 800—regarding complete blood cell count (CBC), leukocyte differential count, and flagging efficacy in a total of 202 samples from hematology patients and normal controls. Manual differential count was used as reference. The analyzers exhibited very good correlation for CBC parameters. Neutrophils and eosinophils also showed very good correlations, whereas lymphocytes and monocytes correlated fairly. The Advia 120 displayed notably lower measurements for both parameters, which is attributable to classification of some events as large unstained cells. Basophil counts were unreliable with all analyzers. Flagging for blasts and immature granulocytes showed moderate sensitivity and specificity. Operators must not rely on blast flagging alone to detect leukemic samples with any analyzer.

BackgroundGraft-versus-host-disease (GvHD) is a major problem in allogeneic stem cell transplantation. We previously described two types of endogenous human leukocyte antigen (HLA)-II restricted antigens depending on their behavior towards HLA-DM. While DM-resistant antigens are presented in the presence of HLA-DM, DM-sensitive antigens rely on the expression of HLA-DO-the natural inhibitor of HLA-DM. Since expression of HLA-DO is not upregulated by inflammatory cytokines, DM-sensitive antigens cannot be presented on non-hematopoietic tissues even under inflammatory conditions. Therefore, usage of CD4+ T cells directed against DM-sensitive antigens might allow induction of graft-versus-leukemia effect without GvHD. As DM-sensitivity is likely linked to low affinity peptides, it remains elusive whether DM-sensitive antigens are inferior in their immunogenicity.MethodsWe created an in vivo system using a DM-sensitive and a DM-resistant variant of the same antigen. First, we generated murine cell lines overexpressing either H2-M or H2-O (murine HLA-DM and HLA-DO) to assign the two model antigens ovalbumin (OVA) and DBY to their category. Further, we introduced mutations within the two T-cell epitopes and tested the effect on DM-sensitivity or DM-resistance. Furthermore, we vaccinated C57BL/6 mice with either variant of the epitope and measured expansion and reactivity of OVA-specific and DBY-specific CD4+ T cells.ResultsBy testing T-cell recognition of OVA and DBY on a murine B-cell line overexpressing H2-M and H2-O, respectively, we showed that OVA leads to a stronger T-cell activation in the presence of H2-O demonstrating its DM-sensitivity. In contrast, the DBY epitope does not rely on H2-O for T-cell activation indicating DM-resistance. By introducing mutations within the T-cell epitopes we could generate one further DM-sensitive variant of OVA and two DM-resistant counterparts. Likewise, we designed DM-resistant and DM-sensitive variants of DBY. On vaccination of C57BL/6 mice with either epitope variant we measured comparable expansion and reactivity of OVA-specific and DBY-specific T-cells both in vivo and ex vivo. By generating T-cell lines and clones of healthy human donors we showed that DM-sensitive antigens are targeted by the natural T-cell repertoire.ConclusionWe successfully generated DM-sensitive and DM-resistant variants for two model antigens. Thereby, we demonstrated that DM-sensitive antigens are not inferior to their DM-resistant counterpart and are therefore interesting tools for immunotherapy after allogeneic stem cell transplantation.

Hintergrund und Ziele: Epigenetische Mechanismen wie DNA-Methylierung spielen bei zahlreichen physiologischen Prozessen, insbesondere bei der Regulation von Genexpression und Stabilisierung der Chromatinstruktur, eine wichtige Rolle. Obwohl Veränderungen in den Methylierungsmustern bei einer Vielzahl psychiatrischer Erkrankungen bekannt sind, ist der epigenetische Einfluss von Medikamenten speziell von Psychopharmaka bis heute kaum untersucht. Ziel dieser Arbeit war es deshalb den Einfluss von Mood-Stabilizern (Carbamazepin, Lithium, Valproinsäure), Neuroleptika (Haloperidol, Olanzapin, Quetiapin, Risperidon), Antidepressiva (Amitriptylin, Fluoxetin, Tranylcypromin) und den beiden Antibiotika Cefotiam und Ciprofloxacin auf die genomische DNA-Methylierung in Zellkultur zu prüfen. Als Referenzsubstanzen dienten 5-Aza-2’-deoxycytidin, Methotrexat und S-Adenosyl-L-methionin. Methoden: In Zellkulturexperimenten wurden SH-SY5Y Neuroblastomzellen mit den oben genannten Substanzen über 6 Stunden, 12 Stunden, 24 Stunden, 2 Tage und 5 Tage stimuliert, um Methylierungsveränderungen im zeitlichen Verlauf zu erfassen. Geeignete Stimulations-konzentrationen der einzelnen Substanzen wurden mit Hilfe eines MTT-Zellvitalitätstests bestimmt. Die Messung der genomischen Methylierung erfolgte mit einem modifizierten, fluoreszenzmarkierten Cytosin-Elongationsassay, beruhend auf einem DNA-Restriktionsverdau und einer anschließenden Fluoreszenzmarkierung mittels einer Elongationsreaktion. Ergebnisse und Beobachtungen : Bei den Referenzsubstanzen zeigte sich nach Behandlung mit 5-Aza-2’-deoxycytidin eine signifikante, nahezu vollständige Demethylierung nach zwei Tagen (p = 0,024) und auch bei Stimulation mit Methotrexat kam es innerhalb dieser Zeit zu einem signifikanten Abfall der Methylierung (p = 0,005). Hingegen hatte die Stimulation mit S-Adenosyl-L-methionin in den durchgeführten Versuchen keinen signifikanten Effekt auf die genomische DNA-Methylierung (p = 0,140). Die untersuchten Mood-Stabilizer Lithium (p = 0,007) und Valproinsäure (p = 0,030) bewirkten eine signifikante Hypomethylierung, wobei unter Valproinsäure diese Reaktion bereits innerhalb der ersten Stunden zu beobachten war, während bei Lithium ein vergleichbarer Abfall der Methylierung nach 12 Stunden einsetzte. Die mit Carbamazepin behandelten Zellen zeigten erst nach fünf Tagen eine Tendenz zur Hypomethylierung, die aber nicht signifikant war (p = 0,084). Bei den Neuroleptika hatte lediglich Risperidon einen signifikanten Einfluss im Sinne einer verminderten DNA-Methylierung innerhalb der ersten zwei Tage (p = 0,006). Zwei weitere getestete, atypische Neuroleptika Olanzapin (p = 0,246) und Quetiapin (p = 0,159) wiesen ebenfalls die Tendenz zur Demethylierung auf, wenngleich dies keine Signifikanz erreichte. Haloperidol als typisches Neuroleptikum veränderte während des gesamten Versuchsverlaufs die genomische Methylierung nicht signifikant (p = 0,437). Von den untersuchten Antidepressiva hatten sowohl das Trizyklikum Amitriptylin (p < 0,001) als auch das SSRI Fluoxetin (p < 0,001) eine hoch signifikante, hypomethylierende Wirkung; der MAO-Inhibitor Tranylcypromin beeinflusste den Grad der DNA-Methylierung nicht signifikant (p = 0,183). Die Antibiotika Cefotiam (p = 0,021) und Ciprofloxacin (p = 0,193) führten zu einer DNA-Hypermethylierung, die allerdings nur bei Cefotiam ein signifikantes Niveau erreichte.Praktische Schlussfolgerungen: Die Ergebnisse belegen, dass einige Psychopharmaka insbesondere Mood-Stabilizer, Antidepressiva und in geringerem Ausmaß auch Neuroleptika epigenetische Veränderungen in Form einer verringerten DNA-Methylierung bewirken können. Im Hinblick auf mögliche pathologische Methylierungsmuster bei der Entstehung psychiatrischer Erkrankungen eröffnet dies neue Therapieansätze und sollte daher weiter untersucht werden. Außerdem sind zusätzliche genspezifische Analysen zum Einfluss von Psychopharmaka auf die DNA-Methylierung (z.B. Dopamintransporter, serotonerge Gene) notwendig, um möglicherweise pathophysiologische Zusammenhänge zu detektieren.