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目的 探讨重组人纤维连接蛋白(retronectin,rn)诱导的细胞因子诱导的杀伤细胞cik增殖、免疫特性及对人类k562细胞杀伤活性的影响.方法 密度梯度分离法分离外周血单个核细胞后分成两组,应用cd3单抗、ifn-γ、il- 2培养cik细胞,一组含rn(rn组),一组不含rn(non-rn组).记录两组细胞增殖速度；用流式细胞术动态测定免疫细胞表型；用cba细胞因子试剂盒检测ifn-γ、tnf-α及il-4的分泌；用cfse/pi双标法测定cik细胞对人红白血病细胞株(k562)的体外杀伤活性.结果 rn组细胞生长明显快于non-rn组(p＜0.05)；cd3+cd8+的细胞随着时间的延长逐渐增多,但两组间比较无统计学差异；cd3+ cd56+细胞所占百分比在第5天和第10天时两组间比较均无统计学差异(p＞0.05),在第15天时rn组有大幅度升高,第15、20、25天两组比较均有统计学差异(p＜0.05).细胞毒杀伤活性结果显示,rn组与non-rn组对k562细胞毒活性亦有统计学差异.两组间细胞因子ifn-γ、tnf-α随着培养时间的延长,分泌量逐渐升高.结论 使用rn诱导的cik细胞增殖速度快,杀伤肿瘤细胞活性高,是一种安全高效的细胞培养方法.

背景与目的CIK细胞是过继免疫治疗的重要手段之一,简化体外培养过程从而提高其增殖率和杀瘤活性仍是目前研究的一个热点课题。本研究观察重组人纤维连接蛋白（recombinant human fibronectin,RN）诱导CIK细胞的生物学特性,建立一种高效、简便的体外CIK细胞扩增方法。方法抽取10名健康人外周静脉血各50mL,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,分别采用RN诱导法和传统方法培养CIK细胞,记录细胞增殖数;用流式细胞术测定免疫细胞表型和分泌IFN-γ、IL-4、穿孔素和颗粒酶B细胞的百分比;用MTT法测定CIK细胞对4种人肺癌细胞株的体外杀伤率。结果RN诱导的CIK细胞扩增倍数为传统方法的2.0倍-3.5倍,具有统计学差异（P〈0.05）;RN诱导组和传统方法组CD3＋CD16＋CD56＋细胞绝对数分别增加了3778倍和2069倍;RN诱导组细胞中CD3＋CD8＋细胞比例明显高于传统方法组（P〈0.05）;但CD3＋CD4＋细胞比例无统计学差异（P〉0.05）;对4种肺癌细胞株的体外杀伤活性无统计学差异（P〉0.05）。RN诱导的CIK较诱导前：分泌IFN-γ的细胞比例明显增加;分泌IL-4的细胞比例略有降低;释放穿孔素、颗粒酶B的阳性细胞比例较诱导前增加。结论RN诱导法是一种高效、简便的体外扩增CIK方法,可以替代传统方法。