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背景与目的 现有研究发现Nm23-H1还存在胞核表达,而既往的研究都是以过表达或抑制胞浆Nm23-H1为研究手段,由于Nm23-H1本身缺乏核引导序列,其研究结果并不能真实反映或重复临床中Nm23-H1以胞核定位为主的实际生物学效应。因此,本研究通过构建带有核引导序列的Nm23-H1载体并转染A549细胞以探讨Nm23-H1从胞浆向胞核转位对肺癌细胞增殖的影响。方法 采用基因重组技术构建带核定位信号序列的p Lentis-CMV-NME1-IRES2-PURO慢病毒载体,酶切和测序鉴定正确后,稳定转染A549细胞后用Western blot和激光共聚焦检测Nm23-H1蛋白的定位和表达,用CCK-8法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞周期变化。结果 成功构建了核内定向表达Nm23-H1的慢病毒载体。转染组在72 h、96 h和120 h时增殖率与空载体组相比均显著升高（P〈0.000,1）。空载体组A549细胞在G0期/G1期所占比例为35.69%,高于转染组的28.28%（t=1.461,P=0.217）;而转染组细胞在G2期/M期所占比例为58.7%,空载体组为31.30%（t=4.560,P=0.010）。结论 Nm23-H1在人肺腺癌A549细胞的核内过表达使细胞主要分布在G2期/M期并促进了细胞的体外增殖。

目的探讨双环醇对四环素所致药物性脂肪肝小鼠肝组织增殖指标的作用。方法 50只ICR小鼠随机分为正常组、四环素模型6h组、双环醇给药6h组、四环素模型24h组、双环醇给药24h组,每组10只。给药组给予双环醇300mg/kg,每12h给药1次,共3次,其余各组同时间点给予等量赋型剂;模型组和给药组于末次给药后1h腹腔注射四环素200mg/kg,对照组给予相同pH值等体积生理盐水。各组动物分别于四环素给药后6h或24h眼球取血,并取肝组织进行检测。采用实时荧光定量PCR法测定肝组织增殖细胞核抗原（PCNA）、周期素D1（Cyclin D1）和c-myc基因表达情况Western blotting法测定肝组织Cyclin D1蛋白表达,免疫组化法测定肝组织PCNA和c-myc蛋白的表达。结果四环素注射后6h小鼠肝细胞PCNA基因表达为对照组的43%（P〈0.01）,同时蛋白表达显著减少,随着时间延长,至24h时基本恢复,而双环醇给药在脂肪肝早期（6h）即能明显抑制肝细胞PCNA基因和蛋白表达的下降（P〈0.01）。四环素注射后24h模型组Cyclin D1表达量为对照组的59%（P〈0.01）,c-myc表达为对照组的5.7倍,双环醇给药在脂肪肝早期（6h）即可显著促进Cyclin D1和c-myc基因表达（P〈0.01）,至24h时能明显促进Cyclin D1蛋白的表达（P〈0.05）。结论双环醇可显著促进四环素所致药物性脂肪肝小鼠肝细胞的增殖,其机制可能与上调增殖基因和蛋白（PCNA、Cyclin D1、c-myc）的表达有关。

目的探讨mi RNA-33a抑制人结肠癌细胞HCT-116增殖的机制。方法化学法合成mi RNA-33a mimics、mi RNA-33a inhibitor及阴性对照（NC）序列,然后转染至HCT-116细胞。转染后48h,采用Real-time PCR检测细胞中mi RNA-33a含量的变化,Western blotting检测细胞中Twist蛋白含量的变化;转染后24、48、72h,采用CCK-8的检测肿瘤细胞增殖活性的变化。采用信息学软件预测mi RNA-33a与Twist的结合位点,并通过荧光素酶报告基因法证实预测的结合位点。结果 mi RNA-33a mimics及mi RNA-33a inhibitor转染后可明显上调或下调HCT-116细胞内mi RNA-33a的相对含量（P〈0.05）,而NC转染组细胞mi RNA-33a含量与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;mi RNA-33a mimics及mi RNA-33a inhibitor转染后可明显下调或上调HCT-116细胞内Twist蛋白的表达,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,而NC转染组细胞内Tw ist含量与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;mi RNA-33a mimics及mi RNA-33a inhibitor转染后可明显下调或上调HCT-116细胞对数生长期的增殖活性,转染后48h和72h与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）,而NC转染组细胞增殖活性与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。荧光素酶实验显示,mi RNA-33a mimics和mi RNA-33a inhibitor转染可以抑制或促进野生型报告基因荧光素酶活性（P〈0.05）,而对突变型报告基因荧光素酶活性无明显影响（P〉0.05）。结论 mi RNA-33a可以通过抑制其靶基因Twist的表达抑制HCT-116细胞的增殖活性。

目的 探讨骨桥蛋白(OPN)基因与食管癌发生及浸润转移的关系,以及青蒿琥酯(Art)抑制食管癌细胞生长的作用与OPN蛋白表达的关系。方法 应用原位杂交及免疫组织化学方法检测45例食管鳞癌组织、21例不典型增生组织、24例正常的食管黏膜上皮组织中OPN基因及蛋白的表达,并分析其与食管癌临床病理特征的关系。以不同浓度(0、30、60、120μmol/L)青蒿琥酯干预食管鳞癌Eca109细胞24h,采用流式细胞术检测细胞周期及细胞中OPN蛋白的表达水平。结果 OPN基因及蛋白在食管鳞癌组织中的表达水平显著高于不典型增生及正常组织(P<0.01),且不典型增生组织中的表达水平显著高于正常组织(P<0.05)。OPN基因及蛋白在食管鳞癌组织中的表达与淋巴结转移及浸润深度呈正相关(P<0.05),与患者性别、年龄及肿瘤的分化程度无明显相关(P>0.05)。青蒿琥酯作用24h后,Eca109细胞增殖指数及OPN蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),且具有浓度依赖性。结论 OPN基因在食管鳞癌组织中异常高表达,可能参与了食管癌的发生及浸润转移。青蒿琥酯抑制食管癌细胞生长的作用可能与其下调细胞中OPN蛋白的表达有关。

目的 探讨siRNA沉默IFITM1基因表达对卵巢癌CP70细胞增殖和侵袭的影响。方法 利用脂质体转染法将靶向IFITM1的小干扰RNA（siRNA）转染卵巢癌细胞株CP70;qRT-PCR和Western blot观察转染后CP70细胞IFITM1mRNA和蛋白表达的变化;平板克隆形成实验和Transwell小室分别检测各组细胞增殖和侵袭能力的变化。结果 转染组CP70细胞的IFITM1mRNA和蛋白表达明显受抑制;转染组、阴性对照组及转染试剂对照组形成克隆数分别为84、181、178,克隆形成率分别为42%、90.5%、89%,迁移出的细胞分别约为59个、121个、126个,转染组结果与其他两组之间有统计学差异,说明转染IFITM1siRNA抑制了卵巢癌CP70细胞增殖和侵袭能力。结论 沉默IFITM1可以降低卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力,IFITM1可能成为卵巢癌治疗的潜在新靶点。

目的探讨Tmub1蛋白在肝细胞增殖中的作用。方法分别使用Tmub1沉默慢病毒载体、Tmub1过表达慢病毒载体及对应的空载体转染大鼠BRL-3A肝细胞,得到稳定转染的细胞。转染后采用Western blotting检测Tmub1蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期。结果转染LV-Tmub1慢病毒的肝细胞Tmub1蛋白表达明显增加,转染LV-Tmub1-RNAi慢病毒的肝细胞Tmub1蛋白表达明显降低,与正常肝细胞比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）。转染LV-Tmub1慢病毒的肝细胞增殖最快,转染LV-Tmub1-RNAi慢病毒的肝细胞增殖最慢,两组之间差异有统计学意义（P〈0.01）。过表达Tmub1慢病毒载体转染的肝细胞的G2＋S期明显长于沉默Tmub1慢病毒载体转染的肝细胞,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 Tmub1蛋白可促进BRL-3A肝细胞的增殖。

目的 构建microR-338-3p（miR-338-3p）过表达载体并探究其对人胃癌SGC-7901细胞系体外增殖的影响.方法 以pcDNATM 6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体为基础,经EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切和纯化后与人工合成miR-338-3p的寡聚核苷酸进行连接,转化至E.Coli Top10后,经过DNA测序、BLAST检测及验证;将构建成功的载体瞬时转染入SGC-7901细胞系中,应用Real-time PCR检测miR-338-3p的表达水平,利用MTT法检测细胞增殖的改变.结果 测序验证成功构建了miR-338-3p的真核表达载体;瞬时转染SGC-7901细胞后miR-338-3p表达水平有显著增加,能够抑制SGC-7901细胞的体外增殖.结论 成功构建了miR-338-3p的真核表达载体,获得了瞬时表达miR-338-3p的人胃癌SGC-7901细胞系,初步证实miR-338-3p过表达可抑制肿瘤细胞的增殖.

目的探讨富含亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体5（LGR5）基因在HeLa细胞增殖及耐药性中的作用及可能机制。方法采用shRNA技术干扰LGR5表达,构建LGR5干扰（shLGR5）的HeLa细胞,并设对照组（shCon）。采用细胞计数、平板克隆以及MTT实验观察shLGR5对HeLa细胞增殖及耐药性的影响;采用Western blot检测LGR5、β-catenin在HeLa细胞中的表达。结果成功构建了LGR5干扰的HeLa细胞系;与shCon组相比,shLGR5组细胞生长速度及克隆形成率明显降低,差异具有统计学意义（P〈0.01）;shLGR5组与shCon组HeLa细胞对顺铂的耐药性差异亦具有统计学意义（P〈0.01）;且干扰LGR5抑制HeLa细胞中β-catenin蛋白的表达。结论 LGR5基因在HeLa细胞增殖及耐药性中有重要作用,且与Wnt/β-catenin通路有关。

目的探讨顺铂（cisplatin）作用于人肝癌细胞系HepG2后细胞增殖能力和周期的变化,及残余细胞中CD133、ABCG2及ICAM-1表达量的变化。方法以人肝癌细胞系HepG2为研究对象,分别采用MTT比色法和PI染色法检测不同浓度cisplatin作用后细胞增殖能力及细胞周期分布的变化;免疫荧光法检测cisplatin对肿瘤干细胞标志物表达量的影响。结果不同浓度cisplatin作用后均可明显抑制HepG2细胞的增殖。进一步研究发现,分别使用4mg/L和2mg/L的cisplatin作用48h后对HepG2细胞周期G0/G1期及S期有显著影响,cisplatin处理使残留HepG2细胞中CD133、ABCG2及ICAM-1的表达量明显升高。结论 HepG2细胞中存在的小部分肝癌干细胞能够逃脱cisplatin的杀伤作用,此种逃避过程的发生可能是临床上肝癌经治疗后复发的重要原因。

目的 研究饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸对肺癌细胞增殖与自噬的影响。方法 用0、30、60、120、240μmol/L硬脂酸(饱和脂肪酸)和DHA(不饱和脂肪酸)分别处理肺癌细胞A549,绘制细胞生长曲线并计算克隆形成率以检测细胞增殖。采用硬脂酸和DHA分别处理A549细胞24h后,采用激光共聚焦显微镜从形态学方面观察细胞自噬情况。采用硬脂酸和DHA分别处理A549细胞12、24、36h后,用Western blotting检测细胞自噬相关蛋白的表达。结果30~240μmol/L硬脂酸和DHA均有抑制A549细胞增殖的作用(P<0.05),硬脂酸、DHA处理A549细胞24h后均检测到细胞出现明显的自噬;Western blotting结果显示,硬脂酸、DHA分别处理A549细胞12、24、36h后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(ser2481)磷酸化水平降低(P<0.05)。结论 饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸均有抑制肺癌细胞增殖、诱导肺癌细胞自噬的作用,其机制可能与p-m TOR(ser2481)信号通路有关。