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Trichoderma harzianum T39 and T. longibrachiatum strain 6 were applied on grapevine to determine their effectiveness against Phaeomoniella chlamydospora on vine cuttings and pruning wounds. Cuttings were dipped in a Trichoderma suspension either before or after callusing. Pre-callusing dips were carried out for 3 years and yielded contradictory results. By contrast, post-callusing Trichoderma dips led to significant growth of hairy roots and a reduction in the longitudinal discolorations caused by P. chlamydospora inoculated into the rootstock after dipping. Trichoderma spp. were also applied to pruning wounds of grafted potted vines, which were then inoculated by placing drops of a conidial suspension of P. chlamydospora on the wound surface. Trichoderma application prevented black goo and necrosis in the wood below the wound. In the vineyard, T. harzianum T39 was sprayed after pruning for two consecutive years. The biocontrol agent was re-isolated from the wood close to the sprayed pruning wounds for up to 2 months after spraying. Although further investigations are necessary, our findings suggest that Trichoderma could be one of the steps in the control of esca [Sono stati effettuati trattamenti alla vite con Trichoderma harzianum T39 e T. longibrachiatum ceppo 6 per determinarne l´efficacia nei confronti di Phaeomoniella chlamydospora su talee e ferite da potatura. Le talee sono state immerse in sospensioni di Trichoderma, sia prima, sia dopo la formazione del callo. I trattamenti prima della formazione del callo sono stati effettuati per 3 anni e hanno fornito risultati contrastanti. Al contrario, quelli successivi alla formazione del callo hanno determinato una crescita significativa delle radici pilifere e una riduzione delle necrosi longitudinali causate da P. chlamydospora inoculata nel portinnesto dopo l´immersione nella sospensione. Le specie di Trichoderma sono state anche applicate a ferite da potatura di viti innestate coltivate in vaso, che sono state successivamente sottoposte a inoculazione ponendo gocce di una sospensione di conidi di P. chlamydospora sulla superficie della ferita. Il trattamento con Trichoderma ha prevenuto lo sviluppo di gommosi nera e di necrosi nel legno al di sotto della ferita. Nel vigneto, T. harzianum T39 è stato irrorato dopo la potatura per due anni consecutivi. L´agente di controllo biologico è stato reisolato dal legno contiguo alle ferite da potatura irrorate fino a due mesi dopo il trattamento. Sebbene siano necessarie ulteriori ricerche, i nostri risultati fanno ritenere che Trichoderma può essere uno dei passaggi nel controllo del mal dell´esca.]

Hot water treatment (HWT) is an effective control for endogenous pathogens, including Phaeomoniella chlamydospora, in grapevine propagating material. However, sporadic unexplained failures of HWT material do occur. In order to determine the most reliable HWT protocols, the effects of HWT at 50 deg C for 30 min, order of HWT and storage (store/HWT and HWT/store) and 3 hydration times (0, 4 and 6 h) on root and shoot development and final condition in dormant cuttings of Cabernet Sauvignon and Chardonnay were evaluated. After incubation, callus, root and shoot development were assessed. Cuttings were potted into cardboard plant bands, grown to marketable size, in a protected environment, and assessed as A grade, B grade or dead. Callus development in Chardonnay was affected by an interaction between HWT protocols and hydration times. Callus was least developed in cuttings hydrated for 15 h and stored before HWT. Callus development in all other treatments was greater (P0.05) regardless of HWT or hydration. By contrast, callus development in Cabernet Sauvignon was greater (P0.05) in HWT than in non-HWT cuttings regardless of the duration of hydration or the order of operations. Root development in Chardonnay was furthest advanced in cuttings hydrated for 15 h (regardless of HWT) and in HWT cuttings not hydrated. HWT was the only factor that affected root development in Cabernet Sauvignon. Root development was greatest in non-HWT cuttings. There were no differences between any of the treatments in either variety at final assessment. On this evidence, nurseries could apply any of the above protocols successfully. However, the benign conditions of the protected environment may have enabled the cuttings to recover from the stresses imposed by the various treatments. Had the cuttings been grown in a field nursery, there might have been differences between treatments at final assessment [Il trattamento con acqua calda (HWT) è un sistema efficace di controllo dei patogeni endogeni, compresa Phaeomoniella chlamydospora, nelle talee della vite. Tuttavia, sporadicamente si osservano insuccessi nel materiale sottoposto all'HWT. Sono stati valutati gli effetti dell'HWT, a 50 gradi C per 30 min, delle modalità di esecuzione (conservazione/HWT e HWT/conservazione) e di tre tempi di idratazione (0, 4 e 6 h) sullo sviluppo della radice e del germoglio e sulla condizione finale di talee dormienti di Cabernet Sauvignon e Chardonnay. Dopo l'incubazione, sono stati controllati il callo, la radice e il germoglio. Le talee sono state allevate in ambiente protetto e classificate come A, B o morte. Lo sviluppo del callo in Chardonnay era influenzato da un'interazione fra i protocolli dell'HWT e i tempi di idratazione. Il callo risultava sviluppato al minimo in talee idratate per 15 h e conservate prima dell'HWT. Lo sviluppo del callo in tutti gli altri trattamenti era maggiore (P0,05) nelle talee HWT rispetto a quelle non trattate indipendentemente dalla durata dell'idratazione e dalla sequenza delle operazioni. Per contro, lo sviluppo del callo in Cabernet Sauvignon era maggiore (P0,05) nelle talee HWT rispetto alle non trattate, indipendentemente dagli altri fattori. Lo sviluppo della radice nello Chardonnay era avanzato al massimo nelle talee idratate per 15 h (indipendentemente dall'HWT) e nelle non idratate. L'HWT era l'unico fattore che influenzava lo sviluppo della radice in Cabernet Sauvignon. Lo sviluppo della radice era massimo nelle talee non trattate. Non sono risultate differenze fra i trattamenti nelle due varietà. In base a questi risultati, i vivai potrebbero applicare ognuno dei protocolli indicati sopra. Tuttavia, le condizioni favorevoli possono aver consentito alle talee di riprendersi dallo stress determinato dai trattamenti. Se le talee fossero state poste in campo, probabilmente si sarebbero riscontrate differenze fra i trattamenti.]

In the period 1998-2001, significant numbers of vine samples of different varieties, grafted onto different rootstocks, ready for outplanting or planted and declined a few months or years later, were collected or sent to our laboratory to investigate the presence of phytopathogenic fungi. Three hundred eighty rooted cuttings ready for outplanting, 1,250 young vines planted and exhibiting decline symptoms in the first year of establishment, 82 vines two to nine year old and 27 year old vines exhibiting the classical esca symptoms were examined. Isolations yielded the fungi Phaeomoniella chlamydospora, Fomitiporia punctata and Stereum hirsutum, as well as other fungi of the genera Phaeoacreminium, Cylindrocarpon and Botryosphaeria. The low incidence of these fungi isolated in a low percentage of samples suggested that they could not by themselves be the cause of young grapevine decline. Abiotic causes, such as lesions from improperly healed rootstock disbudding sites and graft unions made in the nursery, as well as improper storage and transportation conditions of the propagated material must also have played a role and made the decline more acute. The occurrence of the isolated fungi as endophytes and their role in the outbreak of grapevine decline remain to be investigated

Twenty healthy cuttings each were inoculated artificially with Phaeomoniella chlamydospora Phaeoacremonium inflatipes and Phaeoacremonium aleophilum. After the formation of callus, they were planted in pots. Approximately one year after inoculation, disease occurrence was recorded as the length of brown vascular streaking from the base of plant toward the shoot tip. Discolored areas were cultured on potato dextrose agar amended with tetracycline hydrochloride (PDA-tet) and pathogens were re-isolated. Inoculation with Pa. chlamydospora showed that rootstocks 3309, 420A, 110R, 5C, Schwarzmann, St. George, and Salt Creek were least susceptible, while 99R, 39-16, Freedom, Riparia Gloire, 140Ru, 16-16 and 1103 were most susceptible. When inoculated with Pm. inflatipes, 16-16,3309, AXR1, Salt Creek, 110R, 5C, Freedom and 140Ru were least susceptible, while 420A, St. George, 161-49, and Harmony were most susceptible. Inoculation with Pm. aleophilum showed that 1103, 420A, Harmony, and Salt Creek were least susceptible, while 110R, SO4, 39-16 and 161-49 were most susceptible. The susceptibility of the rootstocks and the occurrence of vine decline in the field in California did not appear to be well correlated because 3309, 101-14, 5C, and 110R were always most susceptible. But these rootstocks are the most widely planted, and hence the natural occurrence of the disease is probably skewed towards these rootstocks. However, since no resistance was detected in our study, even though there was a wide range of susceptibility, the degree of rootstock susceptibility may not be such an important factor in disease expression under natural conditions.

Autoclaved sand was inoculated with Phaeoacremonium inflatipes, P. aleophilum and P. chlamydosporum. Single bud cuttings of grapes of cv Chardonnay were placed in inoculated sand and incubated for three weeks at 27 deg C. P. inflatipes was isolated from 66%, P. aleophilum from 59% and P. chlamydosporum from 7% of cultured cuttings. The effect of infection on callusing was also observed. Inoculation with P. clamydosporum , P. aleophilum and P. inflatipes inhibited callus formation in 22, 62 and 72% of total cuttings, respectively. Infection of the cuttings by P. inflatipes, P. aleophilum and P. chlamydosporum significantly (P = 0.0001) reduced number of roots, plant eight, number of internodes, root elongation and dry weight of the above-ground parts. However, no significant (P = 0.1969) effect was found on root dry weight. Infection and vascular discoloration was found in spurs of the Pinot Noir and Chardonnay inoculated with P. chlamydosporum, P. inflatipes and P. aleophilum through pruning wounds. Significant differences were found in extent of invasion in Pinot Noir and Chardonnay in response to inoculation. Invasion of spurs of Pinot and Chardonnay inoculated with P. chlamydosporum was significantly more extensive than invasion by P. inflatipes and P. aleophilum respectively (P = 0.0001) [Sabbia autoclavata e' stata inoculata con Phaeoacremonium inflatipes, P. aleophilum e P. chlamydosporum. Talee a gemma singola di viti della cv Chardonnay sono state poste nella sabbia inoculata e incubate per tre settimane a 27 gradi C. P. inflatipes e' stato isolato dal 66%, P. aleophilum dal 59% e P. chlamydosporum dal 7% delle talee coltivate. E' stato pure osservato l'effetto dell'infezione sulla formazione del callo. L'inoculazione con P. chlamydosporum, P. aleophilum e P. inflatipes inibiva la formazione del callo, rispettivamente, nel 22, 62 e 72% del totale delle talee. L'infezione delle talee da parte di P. inflatipes, P. aleophilum e P. chlamydosporum ha ridotto significativamente (P = 0,0001) il numero delle radici, l'altezza delle piante, il numero di internodi, l'allungamento delle radici e il peso secco delle porzioni epigee delle piante. Comunque, non e' stato osservato alcun effetto significativo (P = 0,1969) sul peso secco delle radici. Nei getti del Pinot Noir e Chardonnay inoculati con P. chlamydosporum, P. inflatipes e P. aleophilum attraverso le ferite da potatura e' stata riscontrata l'infezione e lo scolorimento vascolare. In Pinot Noir e Chardonnay sono state riscontrate differenze significative nell'entita' dell'invasione dei patogeni in risposta all'inoculazione. L'invasione dei germogli di Pinot e Chardonnay con P. chlamydosporum era maggiormente estesa rispetto all'invasione da P. inflatipes e P. aleophilum, rispettivamente (P = 0,0001)]

A procedure was developed for detecting viroids in citrus cuttings collected in the field and forced to sprout in a growth chamber. Leaves collected 15 days or one month after sprouting were tested in comparison with leaf and bark samples from field-grown source plants. Tests were made by using RT-PCR with primers specific for Citrus exocortis viroid (CEVd), the citrus strain of Hop stunt viroid (HpSVd-cit), Citrus bent leaf viroid (CBLVd), Citrus viroid III (CVd-III) or Citrus viroid IV (CVd-IV). No evidence was obtained for the presence of CBLVd and CVd-IV, whereas HpSVd-cit, CEVd and CVd-III were detected consistently in forced cuttings even when no positive amplification was obtained from field samples. This method may be a useful tool in the laboratory detection of citrus viroids [E´ stata sviluppata una procedura per diagnosticare la presenza di viroidi in talee di agrumi prelevate in campo e sottoposte a forzatura in camera di crescita. Foglie raccolte 15 giorni o un mese dopo il germogliamento sono state saggiate in confronto con campioni di foglie e scorza prelevati in campo dalle piante di origine. Sono stati effettuati test mediante RT-PCR con primer specifici per il Viroide dell´esocortite degli agrumi (CEVd), il ceppo degli agrumi del Viroide del nanismo del luppolo (HpSVd-cit), il Viroide della curvatura delle foglie degli agrumi (CBLVd), il Viroide degli agrumi III (CVd-III) o il Viroide degli agrumi IV (CVd-IV). Non è stata evidenziata alcuna presenza di CBLVd e CVd-IV, mentre HpSVd-cit, CEVd e CVd-III sono stati diagnosticati costantemente anche quando non si otteneva amplificazione positiva dai campioni di campo. Questo metodo può essere uno strumento utile nella diagnosi dei viroidi degli agrumi in laboratorio.]

Many grapevine nurseries are presently employing a hot-water treatment for propagation material as a prophylactic measure. The aim of this study was thus to determine the efficacy of this treatment in eliminating fungal endophytes from grapevine cuttings. The number of fungal colonies isolated from the hot-water treated cuttings six months after planting were not, however, significantly different (P = 0.05) from that of the untreated cuttings. This was in contrast to when isolations were made directly after treatment, when no known living fungal pathogens were found inside treated vine tissue. These results therefore indicate that the hot-water treatment is effective in eliminating the most well-known fungal pathogens and endophytes from grapevine tissue. Further research now needs to be focused on combining this treatment with biological control agents, in an attempt to delay recolonisation of tissue by fungal pathogens [Molti vivai viticoli stanno utilizzando attualmente un trattamento con acqua calda come misura profilattica per il materiale di propagazione. Lo scopo di questo studio consisteva quindi nel determinare l'efficacia di questo trattamento ai fini dell'eliminazione dei funghi endofiti dalle talee di vite. Il numero delle colonie fungine isolate dalle talee trattate con acqua calda sei mesi dopo la messa a dimora non e' risultato, comunque significativamente differente (P = 0,05) da quello relativo alle talee non trattate. Questo dato era in contrasto con quello ottenuto effettuando l'isolamento subito dopo il trattamento, caso in cui non si ritrovavano patogeni fungini vitali nei tessuti delle piante trattate. Questi risultati indicano percio' che il trattamento con acqua calda e' efficace per l'eliminazione dei patogeni fungini piu' conosciuti dai tessuti delle viti. Attualmente e' necessario indirizzare ulteriori ricerche alla combinazione di questo trattamento con agenti di controllo biologico nel tentativo di ritardare la ricolonizzazione del tessuto da parte dei patogeni fungini]

Hot water treatments were applied to eradicate Phaeoacremonium inflatipes and Phaeomoniella chlamydospora from dormant grapevine wood. A thirty-minute hot water treatment at 51 deg C did not eliminate these pathogens from dormant wood cuttings. Cuttings first inoculated with Pa. chlamydospora or Pm. inflatipes or both fungi and then subjected to a hot water treatment were either incubated on crispers or planted for six to eight weeks. Vascular discoloration was scored, followed by isolation from the cuttings onto potato dextrose agar amended with 0.1 g l*[-1) tetracycline (PDA-tet). Isolations confirmed the presence of the pathogens in the inoculated, hot-water treated cuttings as well as in the inoculated, untreated control cuttings. This finding, along with earlier research on the direct effect of hot water on the mycelium of these species, leads to the conclusion that hot water treatments are ineffective in eliminating vine decline pathogens from dormant wood [Sono stati effettuati trattamenti con acqua calda per eliminare Phaeoacremonium inflatipes e Phaeomoniella chlamydospora dal legno quiescente di vite. Un trattamento di trenta minuti con acqua calda a 51 gradi C non sopprimeva questi patogeni nelle talee legnose in riposo. Le talee, prima inoculate con Pa. chlamydopsora o Pm. inflatipes o ambedue i funghi e successivamente soggette a un trattamento con acqua calda, sono state incubate in cestelli o piantate per un periodo da sei a otto settimane. E' stata valutata la scoloritura vascolare, cui e' seguito l'isolamento dalle talee su agar destrosio patata addizionato con 0,1 g l*[-1) di tetraciclina (PDA-tet). Gli isolamenti hanno confermato la presenza dei patogeni sia nelle talee trattate con acqua calda, inoculate, sia nei controlli inoculati. Questi risultati, unitamente a quelli derivanti da precedenti ricerche sull'effetto diretto dell'acqua calda sul micelio di queste specie, fanno concludere che i trattamenti con acqua calda non sono in grado di eliminare i patogeni del deperimento della vite dal legno quiescente]

The isolates of Cylindrocarpon destructans used in the present study were selected from a collection of isolates from nursery rootstocks and grapevines showing symptoms of decline in Portugal during the last few years. These isolates were compared on the basis of gross cultural morphology, micromorphology and pathogenicity. The most variable parameter was colony colour. Analysis of micro- and macroconidial size of cultures on \"Spezialler Nahrstoffarmer Agar\" plus 0.1% yeast extract medium (SNAY) revealed that all isolates , except one, cold be clustered in a single group. On carnation leaf agar (CLA) medium, however, all isolates clustered in a single group. All C. destructans isolates were pathogenic on rooted grapevine cuttings of cv Periquita under greenhouse conditions. Internal black-foot symptoms were seen in inoculated plants and the pathogen was reisolated from 60 to 100% of these plants. All C. destructans isolates caused a significant (P = 0.05) decrease in the height of inoculated plants and the majority also caused a significant (P = 0.05) reduction in the number of roots [Gli isolati di Cylindrocarpon destructans utilizzati nel presente studio sono stati selezionati da una collezione di isolati prelevati negli ultimi anni da portinnesti in vivaio e da piante di vite presentanti sintomi di deperimento in Portogallo. Questi isolati sono stati confrontati sulla base della morfologia macroscopica, della micromorfologia e della patogenicita'. Il parametro piu' variabile era il colore delle colonie. L'analisi delle dimensioni dei microconidi e dei macroconidi delle colture realizzate su \"Spezialler Nahrstoffarmer Agar\" piu' lo 0,1% di estratto di lievito ha messo in luce che tutti gli isolati, salvo uno, possono essere inseriti in un singolo gruppo. Su substrato carnation leaf agar (CLA), comunque, tutti gli isolati erano inseribili in un singolo gruppo. Tutti gli isolati di C. destructans erano patogeni su talee radicate di vite della cv Periquita in condizioni di serra. Nelle piante inoculate sono stati riscontrati sintomi interni di piede nero e il patogeno era reisolato dal 60-100% di tali piante. Tutti gli isolati di C. destructans determinavano una diminuzione significativa (P =0,05) dell'altezza delle piante inoculate e la maggior parte causava pure una riduzione significativa (P = 0,05) del numero di radici]

In 2004, virus-like symptoms consisting of yellow rings in older leaves were observed in the foliage of Mandevilla sanderi grown from shoots in the province of Catania (Sicily, Italy). The plants were tested for virus presence using DAS-ELISA, mechanical inoculations to the host, RT-PCR and SSCP. Serological tests detected Cucumber mosaic virus (CMV) in all symptomatic leaf samples. The virus was mechanically transmitted to 11 of the 15 host species tested, including some species of the Chenopodiaceae and Solanaceae families; indicator plants showed symptoms typical of CMV subgroup I. RT-PCR, SSCP and cloning were employed to characterize this CMV isolate and to make clear its genetic relationship with selected CMV isolates from other Countries. From this analysis, CMV-M. sanderi appeared closely related to AY153419 (CMV-PIM-SP-BR, subgroup IA) (nucleotide identities higher than 98%) from Brazil. The virus was transmitted by sap inoculation to healthy M. sanderi plants. As far as we know, this is the first report of virus infection in M. sanderi and it then appears that this ornamental shrub is a new natural host of CMV [Nel 2004 sono stati osservati sintomi riconducibili a virosi, consistenti in anelli giallastri nelle foglie più vecchie, nel fogliame di Mandevillea sanderi derivanti da talee, in provincia di Catania (Sicilia). Sulle piante sono stati effettuati test per accertare la presenza di virus mediante DAS-ELISA, inoculazioni meccaniche dell'ospite, RT-PCR e SSCP. I test sierologici hanno consentito di diagnosticare la presenza del Virus del mosaico del cetriolo (CMV) in tutti i campioni di foglie sintomatiche. Il virus è stato trasmesso per via meccanica a 11 delle 15 specie ospiti saggiate, comprese alcune specie delle famiglie delle Chenopodiaceae e Solanaceae; le piante indicatrici hanno evidenziato i sintomi tipici del CMV sottogruppo I. Sono state impiegati RT-PCR, SSCP e clonazione per caratterizzare questo isolato di CMV e per chiarire i suoi rapporti genetico con isolati di CMV provenienti da altri Paesi. In base a queste analisi, il CMV-M. sanderi è risultato strettamente affine a AY153419 (CMV-PIM-SP-BR, sottogruppo IA) (identità dei nucleotidi maggiore del 98%) di origine brasiliana. In base alle nostre informazioni, questa è la prima segnalazione di infezione virale in M. sanderi ed è quindi evidente che questo arbusto ornamentale è un nuovo ospite naturale del CMV.]