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A detailed account is given of the history, aetiology, biology, epidemiology, detection, geographical distribution, and control of huanglongbing (HLB), a destructive disease of citrus that represents a major threat to the world citrus industry, and is slowly invading new citrusgrowing areas. HLB, whose name in Chinese means \"yellow dragon disease\", was first reported from southern China in 1919 and is now known to occur in next to 40 different Asian, African, Oceanian, South and North American countries. The agent is a phloem-restricted, non cultured, Gram-negative bacterium causing crippling diseases denoted \"greening\" in South Africa, \"mottle leaf\" in the Philippines, \"dieback\" in India, \"vein phloem degeneration\" in Indonesia. The HLB bacterium belongs to the genus Candidatus Liberibacter, three species of which are currently known, Candidatus Liberibacter asiaticus, occurring in Asian countries and, to a lesser extent, in Brazil and the USA (Florida), Candidatus Liberibacter africanus with its subspecies \"capensis\", recorded from African countries, and Candidatus Liberibacter americanus present in Brazil. The suggestion is that each liberibacter species has evolved in the continent after which it is named. HLB symptoms are virtually the same wherever the disease occurs. Infected trees show a blotchy mottle condition of the leaves that results in the development of yellow shoots, the early and very characteristic symptom of the disease. Trees are stunted, declining and bear a few, small-sized, and deformed (lop-sided) fruits, that are poorly coloured (greening) and with coloration starting at the peduncular end (colour inversion). HLB can be transmitted by grafting from citrus to citrus and by dodder to periwinkle. The psyllids Trioza erytreae and Diaphorina citri are natural vectors. Two different types of HLB are known: the heat-sensitive African form transmitted by T. erytreae, which develops at temperatures of 22-25°C, and the heat-tolerant Asian form, transmitted by D. citri, which stands temperatures well above 30°C. Although the HLB pathogen can be identified by electron microscopy, other laboratory methods are used for routine detection. ELISA with monoclonal antibodies is not recommended. Better systems are dot blot hybridization with a DNA probe, and various PCR formats (one-step, nested, multiplex) using species-specific primers based on 16S rRNA or rplKAJL-rpoBC operon sequences. Because no curative methods of HLB are available, control is preventive and largely based on inoculum elimination by removal of infected trees and chemical treatments against vectors. Strict quarantine measures must be implemented to impair further international spread of HLB agents and their vectors.

A double-stranded RNA (dsRNA) ca. 19 Kbp in size was obtained from tissue extracts of a fig plant (Ficus carica) with chlorotic mottling and vein clearing of the leaves. Leaf dips showed the presence of filamentous closterovirus-like particles with distinct cross banding and a length of about 1,800 nm. No virus was recovered by mechanical inoculation to herbaceous hosts. However, virus aggregates were plentiful in thin-sectioned companion cells and differentiating sieve tubes of symptomatic leaves. Using denatured dsRNA preparations as template, a 620 bp cDNA fragment was amplified by RT-PCR using degenerate primers designed on the phosphate motifs 1 and 2 of the heat shock-protein 70 homologue (HSP70h) of members of the family Closteroviridae. Computer-assisted analysis of the sequenced 620 bp fragment showed it to be part of a closteroviral HSP70h gene having identity at the amino acid level with the comparable gene of different closteroviral species ranging from 34 to 48. In a phylogenetic tree constructed with the amino acid sequences of part of the HSP70h of several members of the family Closteroviridae, the fig virus grouped with species of the genus Closterovirus. RT-PCR with specific primers designed on the HSP70h sequence detected the virus in 36 of 57 field-grown trees, most of which had mosaic symptoms. The present results show that fig hosts a putative closterovirus species for which the name of Fig leaf mottle-associated virus (FLMaV) is proposed [E' stato ottenuto un RNA (dsRNA) di ca. 19 Kbp da estratti di tessuti di una pianta di fico (Ficus carica) che presentava maculature clorotiche e ingiallimento delle nervature delle foglie. Gli estratti delle foglie evidenziavano la presenza di particelle filamentose simili ai Closterovirus con rigature incrociate distinte e lunghezza di circa 1.800 nm. Non sono stati ritrovati virus a seguito di inoculazione meccanica a ospiti erbacei. Tuttavia, si riscontrava la presenza abbondante di aggregati virali nelle cellule compagne e nei tubi cribrosi in corso di differenziazione delle foglie sintomatiche. Utilizzando preparazioni di dsRNA denaturato come modello, è stato amplificato, mediante RT-PCR, un frammento di 620 bp di cDNA utilizzando primer degenerati elaborati sui motif fosfatici 1 e 2 dell'omologo della proteina da shock termico 70 (HSP70h) dei membri della famiglia Closteroviridae. L'analisi assistita da elaboratore del frammento di 620 bp sequenziato ha evidenziato che lo stesso è parte di un gene dell'HSP70h closterovirale, con un'identità, a livello aminoacidico, con il gene confrontabile di diverse specie di Closterovirus, variabile dal 34 al 48. In un albero filogenetico costruito con le sequenze aminoacidiche di parte dell'HSP70h di numerosi membri della famiglia Closteroviridae, il virus del fico si raggruppava con le specie del genere Closterovirus. Mediante la RT-PCR con primer specifici sviluppati sulla sequenza dell'HSP70h, è stato possibile diagnosticare il virus in 36 di 57 piante in campo, la maggior parte delle quali presentava sintomi di mosaico. Questi risultati dimostrano che il ficus ospita una specie putativa di Closterovirus, per la quale viene proposto il nome di Virus associato alla maculatura delle foglie di fico (FLMaV).]

As part of a study on fungal toxins, we isolated and identified a series of naphthalenone-related compounds derived from five species of pathogenic fungi. We report here the investigation of the liquid culture medium of Phaeoacremonium aleophilum, one of the most important pathogens in the first stage of esca. Various biological assays on grapevine callus and on Arabidopsis thaliana were performed to ascertain the toxic effect of the seven naphthatlenones isolated from this pathogen [Nel quadro di uno studio sulle tossine fungine, abbiamo isolato e identificato una serie di composti riferiti al naftalenone derivanti da cinque specie di funghi patogeni. In questo contributo riferiamo sullo studio del mezzo di coltura liquido di Phaeoacremonium aleophilum, uno dei patogeni più importanti nel primo stadio del mal dell´esca. Sono stati effettuati vari saggi biologici sul callo di vite e su Arabidopsis thaliana al fine di accertare l´effetto tossico di sette naftalenoni isolati da questo fungo patogeno.]

The presence and colonisation step of apple proliferation phytoplasma in recovered, symptomatic and never symptomatic apple trees were studied. Using serological and molecular techniques, it was demonstrated that recovered plants maintain infectivity in their roots, while they lose phytoplasmas from shoots and leaves; in contrast, apple proliferation symptomatic trees are completely colonised. Several plants that showed no apple proliferation symptoms during twelve years of observation were found to be infected in their roots. Graft transmission experiments with apple proliferation phytoplasma, using both roots and buds collected from donor recovered and symptomatic trees, confirmed the results obtained by the analyses. The graft-inoculated plants did not recover and symptom severity was not influenced by the source of inoculum. To determine the health status of the apple trees as regards apple proliferation the roots must be tested [Sono state studiate la presenza e la fase di colonizzazione del fitoplasma degli scopazzi del melo in piante di melo guarite, sintomatiche e mai sintomatiche. Utilizzando tecniche sierologiche e molecolari, è stato dimostrato che le piante guarite mantengono l'infettività nelle radici, mentre perdono i fitoplasmi nei rami e nelle foglie; al contrario, le piante che presentano i sintomi degli scopazzi sono colonizzate completamente. Numerose piante che non hanno presentato sintomi di scopazzi nel corso di dodici anni di osservazioni sono risultate infettate nelle radici. Esperimenti di trasmissione tramite innesto del fitoplasma degli scopazzi, utilizzando radici e gemme prelevate da piante guarite e da piante con sintomi, hanno confermato i risultati ottenuti dalle analisi. Le piante inoculate tramite innesto non guarivano e la gravità dei sintomi non era influenzata dalla fonte dell'inoculo. Per determinare lo stato di salute delle piante di melo nei riguardi degli scopazzi si devono sottoporre a controllo le radici]

A rain simulator was developed to study the effects of rain on biological and epidemiological aspects (distribution, epiphytic survival) of Pseudomonas syringae pv. tomato populations in the tomato canopy. Two different kinds of rain were simulated. Rain events, relative humidity, drip-irrigation and temperature were automatically controlled and monitored in a growth chamber. Simulated rainfall intensity varied with nozzle size, water pressure at the nozzle and height of the nozzle above the plot surface. Spray nozzles formed drops of 1.6 mm or 2.7 mm in diameter. Rain was simulated on tomato plants already colonized by P. s. pv. tomato (plants with speck symptoms where bacteria were inoculated 5 days before the rain event) and on plants not colonized by the pathogen (inoculated 3 h before the rain event). After each rain simulation, the horizontal and vertical distribution and epiphytic survival of P. s. pv. tomato were observed, for two weeks. Drops 2.7 mm in diameter were more effective in distributing bacteria over short distances and drops 1.6 mm in diameter more effective in long-distance distribution. Higher rain intensity reduced epiphytic survival of P. s. pv. tomato when the host-pathogen relation was precarious (non-colonized tomato plants), but, when the pathogen was already established (colonized plants), higher rain intensity increased bacterial growth [E' stato sviluppato un simulatore di pioggia per studiare gli effetti della precipitazione piovosa sugli aspetti biologici ed epidemiologici (distribuzione, sopravvivenza epifitica) di popolazioni di Pseudomonas syringae pv. tomato nella vegetazione del pomodoro. Sono stati simulati due tipi di pioggia. Gli eventi piovosi, l'umidità relativa, l'irrigazione a goccia e la temperatura erano regolati e controllati automaticamente in una cella climatica. L'intensità della precipitazione simulata variava in funzione della dimensione degli ugelli, della pressione dell'acqua a livello degli stessi e dell'altezza degli ugelli rispetto alla superficie di coltivazione. Gli ugelli formavano gocce di 1,6 e 2,7 mm di diametro. La pioggia è stata simulata su piante di pomodoro già colonizzate da P. s. pv. tomato (piante con sintomi di maculatura batterica, dove i batteri erano stati inoculati 5 giorni prima dell'evento piovoso) e su piante non colonizzate dal patogeno (inoculate 3 ore prima dell'evento piovoso). Dopo ogni simulazione di pioggia, sono state osservate, per 2 settimane, la distribuzione orizzontale e verticale e la sopravvivenza epifitica di P. s. pv. tomato. Le gocce di 2,7 mm di diametro erano più efficaci nel distribuire i batteri su distanze brevi, mentre quelle da 1,6 mm erano più efficaci nella distribuzione a lunga distanza. L'intensità più elevata della pioggia riduceva la sopravvivenza epifitica di P. s. pv. tomato quando la relazione ospite-patogeno era precaria (piante di pomodoro non colonizzate), ma, quando il patogeno era già insediato (piante colonizzate), l'intensità maggiore della pioggia aumentava la crescita batterica.]

Ninety fluorescent pseudomonads obtained from pear cultivars Coscia and Tosca showing symptoms of bacterial blast were assessed by biochemical tests and pathogenicity on lemon fruits and pear and lilac leaves. Presence of the syrB gene and ice-nucleation activity was also determined. In addition, genetic variability was assessed using repetitive sequence PCR with the BOX A1 primer. The patterns were analyzed with UPGMA and Dice's coefficients. Eighty-nine isolates were determined as putative Pseudomonas syringae pv. syringae. Four genomic patterns, A, B, C and D, were obtained by BOX-PCR analysis. Patterns A and C were identical to those shown by other P. s. pv. syringae strains previously isolated from pear in other areas. Pattern B was associated solely with leaf spot symptoms observed on cv Coscia. The syrB gene was present in 38.8% of the isolates, whereas ice-nucleation activity was observed in 77.7%. Isolates possessing the syrB gene were the most aggressive in pathogenicity tests. Different populations of P. s. pv. syringae appear to be involved in inducing blast symptoms on pear in Central Italy [Novanta Pseudomonas fluorescenti provenienti da piante delle cultivar di pero Coscia e Tosca presentanti sintomi di necrosi batterica sono stati sottoposti a test biochimici e a prove di patogenicità su frutti di limone e foglie di pero e di serenella. E' stata pure determinata la presenza del gene syrB e di attività di nucleazione del ghiaccio. Inoltre, è stata accertata la variabilità genetica utilizzando la repetitive sequence PCR con il primer BOX A1. I pattern ottenuti sono stati analizzati con l'UPGMA e i coefficienti di Dice. Ottantanove isolati sono stati identificati come Pseudomonas syringae pv. syringae putativi. Mediante analisi BOX-PCR sono stati ottenuti quattro pattern genomici, A, B, C e D. A e C erano identici a quelli mostrati da altri ceppi di P. s. pv. syringae isolati in precedenza dal pero in altre aree. B era associato solamente ai sintomi di macchie fogliari osservati sulla cv Coscia. Il gene syrB era presente nel 38,8% degli isolati, mentre l'attività di nucleazione del ghiaccio è stata osservata nel 77,7%. Nei test di patogenicità gli isolati che possedevano il gene syrB sono risultati i più aggressivi. Popolazioni diverse di P. s. pv. syringae risultano essere interessate nell'induzione di sintomi di necrosi batterica sul pero in Italia Centrale.]

Several phytotoxic metabolites were extracted from culture filtrates of Phaeoacremonium aleophilum, a fungus associated with the esca of grapevine and related diseases. Two of these metabolites were identified by chemical and spectroscopic methods as scytalone (23.9 mg l*[-1)) and isosclerone (2.4 mg l*[-1)), two naphthalenone pentaketides already known as fungal metabolites. Assayed on detached leaves of grapevine cv Italia, scytalone at 0.05 mg ml*[-1) caused light green to chlorotic, rounded to irregular, interveinal or marginal spots, and isosclerone at 0.1 mg ml*[-1) caused large, coalescent, chlorotic and necrotic spots followed by distortion of the lamina and withering. This is the first report on the production in vitro of scytalone and isosclerone by P. aleophilum, and on the phytotoxic activity of these compounds [Da filtrati di culture di Phaeoacremonium aleophilum, un fungo associato al mal dell'esca della vite e alle patologie collegate, sono stati estratti numerosi composti fitotossici. Due di questi metaboliti sono stati identificati mediante metodi chimici e spettroscopici come scitalone (23,9 mg l*[-1)) e isosclerone (2,4 mg l*[-1)), due pentachetidi del naftalenone gia' conosciuti come metaboliti fungini. Saggiati su foglie staccate di vite cv Italia, lo scitalone a 0,05 mg ml*[-1) causava macchie da verde chiaro a clorotiche, tondeggianti o irregolari, fra le nervature o marginali, e l'isosclerone a 0,1 mg ml*[-1) determinava macchie ampie, coalescenti, clorotiche e necrotiche, seguite da deformazione e imbianchimento della lamina. Questa e' la prima segnalazione sulla produzione in vitro di scitalone e isosclerone da parte di P. aleophilum e sull'attivita' fitotossica di questi composti]

The incidence of esca in 5 vineyards (SCFI, GTFI, CBSI-1, 2, 3) in Tuscany was monitored from 1992 to 1994 in SCFI, from 1993 to 1998 in GTFI, and from 1995 to 1998 in CBSI-1, 2 and 3. Disease incidence varied from vineyard to vineyard and from year to year. SCFI was the vineyard most affected with an incidence of 63% in 1993, 20% in 1994 and 46% in 1992. However, symptom expression in individual plants was characterised by very marked discontinuity from year to year. As a result, only 8% of diseased plants in SCFI had foliar symptoms in all 3 years of the survey period. The percentage of consistently diseased plants went down to less than 1% in GTFI e CBSI-3 and was nil in CBSI-1 and 2. The cumulative disease incidence, calculated by counting all the plants that showed foliar symptoms at least once in the years surveyed, was 82, 50, 19, 12 and 10% in SCFI, GTFI, CBSI-3, 1 and 2 respectively. An examination of rainfall and air temperature parameters in relation to esca incidence did not detect any weather conditions especially conducive to esca. However, it seemed that a fresh, rainy summer is more favourable to the chronic form of esca, while a hot, dry summer is more conductive to the acute form [L'incidenza del mal dell'esca e' stata monitorata in 5 vigneti (SCFI, GTFI, CBSI-1, 2, 3) in Toscana, dal 1992 al 1994 in SCFI, dal 1993 al 1998 in GTFI e dal 1995 al 1998 in CBSI-1, 2 e 3. L'incidenza della malattia variava da vigneto a vigneto e da anno ad anno. SCFI e' stato il vigneto maggiormente colpito con un'incidenza del 63% nel 1993, 20% nel 1994 e 46% nel 1992. Comunque, l'espressione dei sintomi nelle singole piante era marcatamente discontinua da anno ad anno. Piu' precisamente, solo l'8% delle piante ammalate in SCFI ha presentato sintomi fogliari nel corso di tutti 3 gli anni del periodo di indagine. La percentuale di piante sensibilmente affette scendeva a meno dell'1% in GTFI e CBSI-3 ed era nulla in CBSI-1 e 2. L'incidenza cumulativa della malattia, calcolata contando tutte le piante che presentavano sintomi fogliari almeno una volta negli anni in cui e' stata effettuata l'indagine, e' risultata pari a 82, 50, 19, 12 e 10% in SCFI, GTFI, CBSI-3, 1 e 2 rispettivamente. Un esame dei parametri relativi alla temperatura e alla piovosita' in relazione all'incidenza del mal dell'esca non ha consentito di identificare condizioni del tempo particolarmente favorevoli al mal dell'esca. Comunque, e' parso che un'estate fresca e piovosa sia piu' favorevole alla forma cronica, mentre un'estate calda e secca sarebbe maggiormente favorevole alla forma acuta]

Volatile components extracted from the leaves, stems and flowers of Lantana camara, Malvaviscus arboreus, Hibiscus rosa-sinensis cv red flowers and white flowers were tested against the fungi Alternaria solani, Botrytis cinerea, Fusarium solani f. sp. cucurbitae, F. oxysporum f. sp. niveum, Pythium ultimum, Rhizoctonia solani and Verticillium dahliae. The strongest inhibitory effect of the extracts was found with volatile components extracted from the stems and the flowers. Complete inhibition was achieved against V. dahliae. The weakest effect was against P. ultimum. Volatile components extracted from the leaves were not effective [Sono stati testati componenti volatili estratti dalle foglie, dai fusti e dai fiori di Lantana camara, Malvaviscus arboreus, Hibiscus rosa-sinensis cv a fiori rossi e a fiori bianchi in relazione all'attività nei confronti dei funghi Alternaria solani, Botrytis cinerea, Fusarium solani f. sp. cucurbitae, F. oxysporum f. sp. niveum, Pythium ultimum, Rhizoctonia solani e Verticillium dahliae. L'effetto inibitorio più forte è stato riscontrato con i componenti volatili estratti dai fusti e dai fiori. E' stata ottenuta un'inibizione completa verso V. dahliae. L'effetto più debole è stato osservato nei confronti di P. ultimum. I componenti volatili estratti dalle foglie sono risultati inefficaci.]

Cerato-platanin (CP) is a purified protein isolated from the culture filtrate of the ascomycete Ceratocystis fimbriata f. sp. platani (Cfp), the causal agent of canker stain disease of plane. The responses of cells/tissues of plane leaves to CP were studied by light microscopy (LM) and by transmission electron microscopy (TEM), using two experimental procedures. The most significant responses occurred already at 24 h after treatments and were also visible at 48 h. The main effects of CP were to cause a great increase in primary starch and a certain degree of intercellular and intracellular disorganization of the spongy parenchyma cells and plasmolysis processes. In addition, an increase of intracellular phenolic compounds was observed in the palisade cells. The effects of Cfp were similar but less evident than those of CP [La cerato-platanina (CP) è una proteina purificata isolata dal filtrato di coltura dell'ascomicete Ceratocystis fimbriata f. sp. platani (Cfp), agente causale del cancro colorato del platano. Sono state studiate le risposte delle cellule e dei tessuti delle foglie di platano alla CP mediante microscopia ottica (LM) e microscopia elettronica a trasmissione (TEM), utilizzando due procedure sperimentali. Le risposte più significative si sono verificate già a 24 h dai trattamenti ed erano visibili anche a 48 h. I principali effetti della CP consistevano nel determinare un grande aumento dell'amido primario e un certo grado di disorganizzazione intercellulare e intracellulare delle cellule del parenchima lacunoso e processi di plasmolisi. Inoltre, è stato osservato un aumento dei composti fenolici nelle cellule del tessuto a palizzata. Gli effetti di Cfp erano simili, ma meno evidenti di quelli della CP.]