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目的探讨低浓度亚砷酸钠诱导肝癌干细胞（LCSCs）分化的分子途径。方法采用免疫荧光、Western blotting和荧光定量PCR分析肝细胞癌（HCC）组织和细胞PML、Oct4和Sox2基因的表达情况,比较低浓度亚砷酸钠处理后HCC细胞PML、Oct4和Sox2基因表达及LCSCs生物功能的变化,确定低浓度亚砷酸钠对LCSCs分化的诱导作用及其分子途径。结果 0.5μg/ml亚砷酸钠可明显抑制Hu H7和原代HCC细胞形成肿瘤球,增强Hu H7细胞对吡柔吡星（THP）的敏感性（P〈0.01）,并抑制Hu H7和原代HCC细胞移植成瘤的能力（P〈0.05）。HCC组织和细胞表达PML、Oct4、Sox2m RNA和蛋白,且0.5μg/ml亚砷酸钠可使Oct4、Sox2 m RNA（P〈0.05）和蛋白（P〈0.01）表达下调。0.5μg/ml亚砷酸钠处理后Hu H7和原代HCC细胞PML蛋白表达明显下调（P〈0.05）,而Hep3B、Hep G2、SMCC-7721、Hu H7和原代HCC细胞PML m RNA表达无明显变化。0.5μg/ml亚砷酸钠可抑制含LCSCs的Hu H7和原代HCC细胞关键基因Oct4、Sox2 m RNA的表达（P〈0.05）,而且能改变LCSCs对THP的敏感性、抑制肿瘤球形成和异体移植成瘤等生物学特征。结论 HCC组织和细胞表达PML m RNA及蛋白,低浓度亚砷酸钠与HCC细胞内PML蛋白直接结合使之降解,PML核体（PML-NB）随之崩解,PML-NB上与增殖分化相关基因的转录被抑制,从而下调HCC细胞Oct4、Sox2等LCSCs相关基因的表达,抑制HCC细胞生长和诱导LCSCs分化。

目的探讨Wnt-11体外诱导骨髓间充质干细胞（BMMSCs）分化为心肌样细胞的最适浓度。方法采用全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMMSCs,取第2代BMMSCs培养48h后进行定向诱导,根据Wnt-11终浓度的不同分为A组（100ng/mL）,B组（200ng/mL）,C组（400ng/mL）和D组（空白对照组）,诱导72h后更换为完全培养液继续培养4周,D组仅用完全培养液培养。倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态学变化。运用流式细胞仪检测技术对BMMSCs表面联合标记物进行鉴定。各组细胞培养至第4周时,运用免疫细胞化学染色技术检测结蛋白（Desmin）、间隙连接蛋白43（Connexin43）及心肌肌钙蛋白I（cTnI）的表达情况。运用透射电镜观察分化细胞的超微结构变化。实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测各组细胞在诱导后培养第1、2、4周时心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2.5及α-MHC的表达。结果 1原代BMMSCs于第2周形成集落,多呈梭形、星形,少数形状不规则。传代后细胞体积变大,诱导后细胞多为长梭形,呈一致性生长。2流式细胞仪检测技术对BMMSCs表面联合标记物的鉴定结果显示CD29、CD45、CD90的阳性表达率分别为97.9%、0.4%和99.5%。3免疫细胞化学染色技术检测结果显示：诱导后常规培养至第4周,A组、B组、C组细胞胞质均呈阳性表达Desmin、Connexin43和cTnI,而D组细胞呈弱阳性或阴性表达,B组细胞的阳性表达率均最高,差异具有统计学意义（P〈0.05）。4透射电镜结果显示：各诱导组细胞于诱导后常规培养至第4周,胞质内可见平行排列的肌丝及亚细胞结构如线粒体、粗面内质网和核糖体。5RT-qPCR检测结果显示：BMMSCs经诱导后,常规培养第1周时各诱导组细胞均表达GATA-4及Nkx2.5基因,在第2周时表达减弱,在第4周时表达增强,就基因表达而言,三个诱导组相比较,B组明显优于其他两组（P〈0.05）。α-MHC基因在诱导后常规培养期间均不表达。对照组细胞在常规培养期间GATA-4及Nkx2.5基因的表达量为1,而不表达α-MHC基因。结论 Wnt-11可在体外诱导SD大鼠BMMSCs定向分化为心肌样细胞,其诱导分化最适浓度为200ng/mL。

目的探讨富勒醇对基于悬滴培养的大鼠脂肪间充质干细胞（r ADSCs）向成骨细胞分化的影响。方法将rADSCs通过悬滴培养3d形成大鼠脂肪间充质干细胞球,将细胞球用胰酶消化分散成单细胞,对获得的单细胞进行二维贴壁培养24h,然后更换为成骨诱导培养基培养,其中未添加富勒醇组为对照组,添加1.0μmol/L富勒醇组为实验组,诱导分化14d及21d后利用茜素红染色和实时定量PCR检测脂肪干细胞球来源的单细胞向成骨细胞分化的能力。结果悬滴培养3d的rADSCs可形成大小均一的微球结构,经胰酶消化分散可获得细胞球来源的单细胞。与对照组相比,在成骨诱导培养基中添加1.0μmol/L富勒醇可使所获单细胞形成更多的矿化的钙结节,且相关成骨基因Runx2、OCN、ColⅠ的表达增强。结论富勒醇可以显著增强基于悬滴培养获得的rADSCs的成骨分化,有助于提高其成骨诱导的效率。

诱导型多能干细胞技术是一种通过新的体细胞重编程，将组织细胞转化为可多向分化的细胞即干细胞的技术。目前已将4种转录因子导入人体皮肤纤维母细胞，并首次成功诱导出诱导型多能干细胞。此项技术不但可以建立神经系统疾病动物模型，用于发病机制和致病基因的研究，而且可以开展移植研究，验证疗效及筛选药物。

目的报告1例成人髓母细胞瘤伴肌原性分化病例,探讨其临床病理学特征,并复习文献,以提高对此类肿瘤的诊断与鉴别诊断能力。方法与结果女性患者,32岁,临床表现为反复口角歪斜、面部麻木6年余。T1WI显示小脑蚓部和脑干背侧混杂信号影,并突向第四脑室;增强扫描显示病灶内类圆形强化结节。手术全切除肿瘤。术中见肿瘤位于小脑蚓部,突向第四脑室并侵及脑干。组织学形态,卵圆形核瘤细胞呈片状密集或散在分布,可见＂菊形团＂样结构,胞质丰富、嗜酸性,胞核偏位、异型性明显,可见核仁或染色质深染,核分裂象易见,伴出血。免疫组织化学染色,肿瘤细胞弥漫性表达整合酶相互作用分子1、突触素、嗜铬素A、人互联蛋白神经元中间丝蛋白α、神经微丝蛋白、巢蛋白、β-联蛋白和P53,部分表达结蛋白、神经元核抗原和S-100蛋白,不表达胶质纤维酸性蛋白、少突胶质细胞转录因子2、CD99、广谱细胞角蛋白、上皮膜抗原、肌调蛋白1、肌浆蛋白、肌特异性肌动蛋白和平滑肌肌动蛋白,Ki-67抗原标记指数约为10%。病理诊断：髓母细胞瘤伴肌原性分化（WHOⅣ级）。术后未接受放射治疗或药物化疗,随访9个月未见肿瘤复发。结论髓母细胞瘤是一种常见于儿童小脑的恶性侵袭性胚胎性肿瘤。发生于成人的髓母细胞瘤伴肌原性分化病例少见,含原始神经外胚层细胞和横纹肌母细胞成分是其特点,诊断时应注意与中枢神经系统原始神经外胚层肿瘤、非典型畸胎样/横纹肌样肿瘤和横纹肌肉瘤相鉴别。

目的建立人羊水来源多潜能干细胞的体外培养体系,探讨其生物学特性和定向分化能力。方法取人孕中期羊水标本进行原代培养,采用贴壁法分离获得干细胞。以流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达,并使用特定培养基诱导羊水多潜能干细胞向成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞分化。结果体外培养的羊水干细胞呈纺锤形,增长迅速,细胞表达Oct-4、SSEA-4、CD29、CD44、CD105、CD117,但不表达造血干细胞表面标志CD45、CD133。羊水干细胞在体外诱导可以分化出成骨细胞、脂肪细胞和神经细胞。结论分离获得的干细胞体外增殖能力强,可表达多潜能干细胞和胚胎干细胞的标志基因,符合多潜能干细胞的特点。在适宜的培养条件下,羊水多潜能干细胞具有向成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞分化的能力。

目的探讨在体外诱导脂肪来源干细胞（ADSCs）分化为黏膜上皮细胞的可能性。方法获取成年人皮下脂肪组织,进行ADSCs的分离、培养,扩增至第三代进行细胞免疫表型、分化情况及遗传稳定性鉴定。分别采用含10%胎牛血清、8μg/L表皮生长因子（EGF）、10%胎牛血清＋8μg/L EGF、10%胎牛血清＋8μg/L EGF＋30%成纤维细胞培养基、10%胎牛血清＋30%成纤维细胞培养基的DMEM培养液进行培养,于培养前及培养后7、14d观察各组细胞的光镜特征,采用免疫组织化学染色检测特异性细胞表面标记物的表达以及Western blotting方法检测诱导前后ADSCs中CK-7、CK-14的蛋白表达水平。结果与未加EGF诱导剂培养组比较,经EGF诱导14d后多数ADSCs细胞形态、排列方式发生改变。CK-19免疫组化染色显示呈强阳性。Western blotting检测结果提示诱导后的黏膜上皮细胞特异性蛋白CK7、CK14呈高表达。结论 ADSCs在一定诱导条件下可向黏膜上皮样细胞分化。

Osteocytes reside as three-dimensionally（3D） networked cells in the lacunocanalicular structure of bones and regulate bone and mineral homeostasis. Despite of their important regulatory roles, in vitro studies of osteocytes have been challenging because：（1） current cell lines do not sufficiently represent the phenotypic features of mature osteocytes and（2） primary cells rapidly differentiate to osteoblasts upon isolation. In this study, we used a 3D perfusion culture approach to：（1） construct the 3D cellular network of primary murine osteocytes by biomimetic assembly with microbeads and（2） reproduce ex vivo the phenotype of primary murine osteocytes, for the first time to our best knowledge. In order to enable 3D construction with a sufficient number of viable cells, we used a proliferated osteoblastic population of healthy cells outgrown from digested bone chips. The diameter of microbeads was controlled to：（1） distribute and entrap cells within the interstitial spaces between the microbeads and（2） maintain

99mTc-Methylene diphosphonate （99mTc-MDP） is widely used in clinical settings to detect bone abnormalities. However, the mechanism of 99mTc-MDP uptake in bone is not well elucidated. In this study, we utilized a mouse tibia injury model, single-photon emission computed tomography （gamma scintigraphy or SPECT）, ex vivo micro-computed tomography, and histology to monitor 99mTc-MDP uptake in injury sites during skeletal healing. In an ex vivo culture system, calvarial cells were differentiated into osteoblasts with osteogenic medium, pulsed with 99mTc-MDP at different time points, and quantitated for 99mTc-MDP uptake with a gamma counter. We demonstrated that 99mTc-MDP uptake in the injury sites corresponded to osteoblast generation in those sites throughout the healing process. The 99mTc-MDP uptake within the injury sites peaked on day 7 post-injury, while the injury sites were occupied by mature osteoblasts also starting from day 7. ~mTc-MDP uptake started to decrease 14 days post-surgery, when we observed the

目的探讨悬滴培养对人脂肪来源间充质干细胞（hADSCs）成骨诱导分化的影响。方法利用酶消化法分离培养hADSCs,采用流式细胞术检测其表面标志的表达。对hADSCs进行悬滴培养,贴壁后添加诱导剂对其进行成骨诱导分化,以平板培养组为对照,诱导分化7d及21d时,利用RT-PCR检测成骨基因Runx2及Osteopontin的表达。结果分离培养的hADSCs表达干细胞表面标志CD44、CD90、CD105,不表达CD34、CD45;悬滴培养3d的hADSCs可形成大小均一的球状三维结构;RT-PCR结果表明,在成骨诱导分化的不同时间点,hADSCs悬滴培养组的成骨基因Runx2及Osteopontin表达均比平板培养组高,表明悬滴培养可促进hADSCs的成骨诱导分化。结论悬滴培养有利于hADSCs的成骨诱导分化,有助于提高其成骨诱导效率。