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目的利用小片段干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）抑制S100A6蛋白的表达,为研究CacyBP/SIP核转位机制提供有利的工具。方法设计S100A6的siRNA序列,用脂质体LipofectamineTM 2000将siRNA转染至人结肠癌SW480细胞中,在荧光显微镜下观察转染效率,用Real-time PCR及Western blot方法检测S100A6在人结肠癌SW480细胞内的mRNA和蛋白表达。结果构建了3对S100A6-siRNA,荧光显微镜下检测转染人结肠癌SW480细胞成功;RT-PCR证明了在SW480细胞内S100A6的mRNA表达显著降低（P〈0.05）;Western blot证明了SW480细胞内S100A6蛋白表达显著降低（P〈0.05）;与S100A6si-1、S100A6si-3组相比,S100A6si-2组对S100A6的mRNA和蛋白抑制效果最明显（P〈0.05）。结论成功构建了S100A6-siRNA,为CacyBP/SIP核转位机制研究提供了有利的工具。

目的 观察下调尾型同源盒基因-2（CDX2）对结肠癌细胞侵袭迁移能力的影响,并初步探讨CDX2基因在结肠癌发生发展过程中的作用及机制。方法 构建CDX2RNAi慢病毒载体,并转染人结肠癌SW480、HT29细胞,应用Western blotting及qRT-PCR技术检测CDX2基因的干扰效率;应用Transwell及划痕实验检测下调CDX2表达对SW480、HT29细胞侵袭、迁移能力的影响;Western blotting及RT-PCR检测下调CDX2表达对SW480、HT29细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关基因（E-cadherin、ZEB-1、Vimentin、Twist、Snail）表达的影响。结果 构建的CDX2RNAi慢病毒载体可有效地抑制SW480、HT29细胞中CDX2基因的表达;转染LV-CDX2-shRNA组与转染空病毒组（LV-NT-shRNA）及空白对照组相比,侵袭、迁移能力显著增强（P〈0.05）;且E-cadherin表达下降,ZEB-1、Vimentin、Twist、Snail表达均升高。结论 下调CDX2可诱导EMT发生,从而增强结肠癌细胞的侵袭迁移能力。

近年来我国结肠癌的发病率逐年升高,且晚期患者死亡率较高。结肠癌患者的主要死亡原因是术后转移和复发。淋巴结转移是临床肿瘤分期的关键,同时也决定了术后是否需要实施辅助治疗,对患者的预后影响较大,因此阳性淋巴结的检出对于结肠癌的病理分期尤为关键。

目的研究参与内毒物代谢的重要酶谷胱甘肽-S-转移酶M1（glutathione-s—transferaseM1，GSTM1）在结肠癌细胞系中的基因表达状况与其遗传基因型及启动子甲基化的关系。方法采用多重PCR方法检测GSTM1基因型，甲基化特异PCR（MSP）方法检测GSTM1基因启动子甲基化状态；用5-aza-dC处理结肠癌细胞系，RT—PCR方法检测GSTM1基因转录水平。结果结肠癌细胞系HT29、SW480、SW1116为GSTM1非空白基因型，而HCT116、Lovo、Colo结肠癌细胞系为GSTMl空白基因型。MSP检测发现SW1116细胞中GSTMl基因主要呈非甲基化状态，其他5个细胞系中呈甲基化状态，而且基因表达缺失。经5-aza—dC处理后，HT29和SW480细胞的GSTM1基因表达复活，而HCT116、Lovo、Colo细胞中GSTM1仍无扩增。结论GSTM1基因转录受到遗传基因型和表观遗传启动子甲基化双重调控。

目的研究结肠癌患者外周血树突状细胞（DC）体外诱导后在裸鼠体内的抗癌效应。方法通过皮下移植法建立裸鼠模型，按治疗次数分为对照组、治疗组和加强组；从患者外周血中分离并培养出DC，以肿瘤抗原和金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）刺激DC；DC激活同源T淋巴细胞；DC激活的T淋巴细胞经用该患者结肠腺癌细胞建立的裸鼠模型的尾静脉注入，观察成瘤时间、肿瘤生长情况、移植肿瘤大小及裸鼠摄食、活动状况。结果成功建立结肠癌裸鼠模型。肿瘤接种第60天，对照组、治疗组及加强组肿瘤大小分别为（3899±22）mm^3、（1301±16）mm^3、（392±18）mm^3。与对照组相比，治疗组及加强组移植瘤生长均受到抑制（P=0．000）；与治疗组相比，加强组移植瘤生长抑制更明显（P=0．000）。结论同源结肠癌患者外周血DC和T淋巴细胞共孵后能抑制裸鼠体内移植瘤的生长。这有可能为肿瘤治疗提供一种新的方法。

目的 联合检测结肠癌患者外周血中DcR3与癌胚抗原（CEA）mRNA的水平，建立取材于外周血的早期诊断结肠癌的新方法。方法 44例结肠癌患者和30名健康志愿者，各取5mL静脉血，肝素抗凝，密度梯度离心法分离外周血单核细胞，细胞总RNA TRIzol提取液提取外周血单核细胞总RNA，用半定量RTPCR法检测外周血单核细胞中DcR3与CEA mRNA的水平，并用t检验进行比较。结果 结肠癌患者外周血中DcR3基因的相对表达水平为0．415±0．078，与健康对照组（0．235±0．074）比较有显著性差异（P〈0．05），但患者之间没有明显差异（P〉0．05）。CEA在结肠癌患者外周血中阳性率为36．4％（16／44），表达水平为0．346±0.071。30名健康志愿者均为阴性。结论 DcR3基因在结肠癌患者外周血中表达水平明显高于健康人，其表达水平与结肠癌有相关性。在CEA阴性情况下，DcR3可能成为新的肿瘤标志物。

目的探讨DNA甲基转移酶1（DNMT1）、β-连环素（β-catenin）和磷酸化糖原合成酶激酶（P-GSK-3β）在结肠癌中的表达及其与肿瘤分化程度和淋巴结转移等的关系。方法采用荧光定量PCR检测62例原发性结肠癌患者癌组织及21例正常大肠黏膜组织中DNMT1、β-catenin和GSK的表达，采用Western blot方法验证蛋白的表达情况。结果结肠癌组织中DNMT1、β-catenin和P-GSK-3β表达程度显著高于正常组织。DNMT1在低分化程度的癌组织间相对含量高，β-catenin在肿瘤的不同分化程度及有无淋巴结转移的癌组织间相对含量的差异有统计学意义，而P-GSK-3β的组间比较无显著性差异。结论DNMT1、β-catenin和P-GSK-3β的活性改变与结肠癌有一定的相关性。

目的 探讨hTERT和p21(WAF1／CIP1)(以下简称p21)在结肠癌发病中的作用及其相互关系。方法 采用原位杂交和SABC免疫组化技术，分别检测45例结肠癌、10例结肠腺瘤及10例正常结肠组织中hTERT和p21的表达。结果 hTERT、p21阳性反应不仅见于结肠癌(阳性率分别为88．9％、46．7％)，而且也见于结肠腺瘤(阳性率分别为50．0％、10．0％)；结肠癌中hTERT阳性率在晚临床分期(C+D)病例中增高(P<0．05)，而p21阳性率在低分化癌及晚临床分期(C+D)病例中降低(P<0．05)；结肠癌中hTERT表达与p21表达有相关性(P<0．05)。结论 hTERT表达和p21缺乏均与结肠癌发生有关，其表达变化可用于评估结肠癌的生物学行为和判定预后，且hTERT较p21更具参考价值。

目的 通过检测P27^Kipl及Ki-67抗原在结（直）肠腺瘤、腺癌中的表达，探讨其与临床病理指标及预后的关系。方法 采用免疫组织化学方法检测了20例正常结（直）肠粘膜、16例腺瘤、62例腺癌的P27^Kipl及Ki-67抗原的表达。结果 正常粘膜、腺瘤至腺癌的等级与P27^Kipl表达等级呈负相关，而与Ki-67抗原表达等级呈正相关。腺瘤与腺癌细胞质P27^Kipl表达有显著性差异（P＜0．05）。腺癌组P27^Kipl表达与Ki-67抗原表达、肿瘤有无转移、Dukes'分期及国际TNM分期呈负相关；Ki-67抗原表达与有无转移呈正相关。P27^Kipl表达阳性腺癌患者无病生存时间长于表达阴性者。结论 在结（直）肠肿瘤的发生、发展及转移过程中，P27^Kipl表达下调，Ki-67抗原表达上调；P27^Kipl表达对评估结（直）肠癌患者预后有一定帮助。

Multidrug resistance （MDR） is a major hurdle in cancer chemotherapy and makes the treatment benefits unsustainable. Combination therapy is a commonly used method for overcoming MDR. In this study we investigated the anti-MDR effect of dihydroartemisinin （DHA）, a derivative of artemisinin, in combination with doxorubicin （Dox） in drug-resistant human colon tumor HCTS/ADR cells. We developed a tumor-targeting codelivery system, in which the two drugs were co-encapsulated into the mannosylated liposomes （Man- liposomes）. The Man-liposomes had a mean diameter of 158.8 nm and zeta potential of-15.8 mV. In the HCTS/ADR cells that overexpress the mannose receptors, the Man-liposomes altered the intracellular distribution of Dox, resulting in a high accumulation of Dox in the nuclei and thus displaying the highest cytotoxicity （ICso=0.073 pg/mL） among all the groups. In a subcutaneous HCT8/ADR tumor xenograft model, administration of the Man-liposomes resulted in a tumor inhibition rate of 88.59%, compared to that of 47.46% or 70.54%, respectively, for the treatment with free Dox or free Dox＋DHA. The mechanisms underlying the anti-MDR effect of the Man- liposomes involved preferential nuclear accumulation of the therapeutic agents, enhanced cancer cell apoptosis, downregulation of Bcl-xl, and the induction of autophagy.