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背景与目的非小细胞肺癌的顺铂耐药是常见的临床现象,严重制约了患者的化疗效果,是亟待解决的问题。SIRT1和Noxa的表达变化影响肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。本研究旨在研究SIRT1表达对非小细胞肺癌对顺铂的敏感性的影响,并探讨其涉及Noxa表达的机制,以求为提高非小细胞肺癌细胞对顺铂敏感性提供希望。方法利用实时荧光定量PCR和Western blot分析A549细胞及顺铂耐药的A549/DDP细胞SIRT1及Noxa m RNA和蛋白水平的表达差异。利用si RNA干扰技术抑制A549/DDP细胞的SIRT1表达,进而使用Cell Titer Blue试验、流式细胞术从细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡方面分析SIRT1沉默对A549/DPP细胞顺铂敏感性的影响。同时利用实时荧光定量PCR和Western blot分析SIRT1抑制对A549/DPP细胞Noxa表达的影响。结果 A549细胞和A549/DDP细胞对顺铂的敏感性有显著差异,与A549细胞相比,A549/DDP细胞的SIRT1表达较高,但Noxa表达较低。使用si RNA抑制A549/DPP细胞的SIRT1表达后,与未抑制SIRT1细胞相比,4μg/m L顺铂处理后的细胞存活率降低,G2期/M期阻滞比例增加,凋亡率提高。同时,SIRT1沉默导致A549/DPP细胞的Noxa表达增加。结论较高的SIRT1可能引起A549细胞对顺铂的耐药性,抑制SIRT1可以提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,其机制可能涉及SIRT1对Noxa的调节。

目的 观察铁碳纳米粒搭载顺铂对肺癌细胞的抑制作用及对肺癌细胞Caspase 3和Survivin mRNA表达的影响。方法 将肺癌细胞分为对照组、药物组、微粒组和药物微粒组,MTT法检测细胞生长活性,RT-PCR法检测肺癌细胞Caspase 3及Survivin mRNA的表达。结果 药物微粒组和药物组肺癌细胞的生长明显受抑制,尤其药物微粒组的抑制作用更为突出,且出现凋亡征象。药物组和药物微粒组肺癌细胞Caspase3mRNA表达水平高于对照组,而Survivin mRNA表达减弱,并且药物微粒组的作用较药物组更为显著（P〈0.05）。结论 铁碳纳米粒搭载顺铂能够显著增加肺癌细胞对顺铂的敏感性,增强药物的化疗效果。

目的探讨顺铂（cisplatin）作用于人肝癌细胞系HepG2后细胞增殖能力和周期的变化,及残余细胞中CD133、ABCG2及ICAM-1表达量的变化。方法以人肝癌细胞系HepG2为研究对象,分别采用MTT比色法和PI染色法检测不同浓度cisplatin作用后细胞增殖能力及细胞周期分布的变化;免疫荧光法检测cisplatin对肿瘤干细胞标志物表达量的影响。结果不同浓度cisplatin作用后均可明显抑制HepG2细胞的增殖。进一步研究发现,分别使用4mg/L和2mg/L的cisplatin作用48h后对HepG2细胞周期G0/G1期及S期有显著影响,cisplatin处理使残留HepG2细胞中CD133、ABCG2及ICAM-1的表达量明显升高。结论 HepG2细胞中存在的小部分肝癌干细胞能够逃脱cisplatin的杀伤作用,此种逃避过程的发生可能是临床上肝癌经治疗后复发的重要原因。

目的观察低氧情况下肾上腺髓质素（ADM）对卵巢癌细胞及在体肿瘤的生长促进作用。方法三种卵巢癌细胞系A2780、SKOV3、HO-8910于低氧环境中培养6~24h,采用RT-PCR分析ADM、低氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）的mRNA表达改变。通过质粒转染获得稳定表达ADM-shRNA的HO-8910细胞,流式细胞术检测ADM表达沉默后卵巢癌细胞的细胞凋亡比例。建立卵巢癌细胞裸鼠荷瘤模型,各组裸鼠每天腹腔内注射5mg/kg的顺铂或皮下瘤内注射10μg/kg的ADM-shRNA,观察肿瘤体积变化并采用Western blot检测ADM蛋白表达。结果 HO-8910细胞24h低氧使ADM mRNA表达上升4.13倍（P〈0.000 1）,VEGF、HIF-1α的mRNA表达则比对照组升高3.46（P〈0.01）和3.91倍（P〈0.000 1）。转染72h后,shADM组细胞ADM蛋白表达量比对照组降低48.2%（P〈0.05）,mRNA比对照组降低26.9%（P〈0.000 1）。shADM组凋亡细胞比例显著高于正常组（shADM组：42.65%;正常组：8.4%;二者相比P〈0.01）。顺铂＋shADM组的抑瘤率为71.39%,显著高于顺铂＋PBS组的39.21%（P〈0.001）或者盐水＋shADM组的49.45%（P〈0.05）。结论低氧环境可诱导卵巢癌细胞ADM表达增加,激活VEGF和HIF-1相关信号通路,继而促进卵巢癌细胞的生长存活。ADM基因沉默能显著促进卵巢癌细胞凋亡并加强顺铂对裸鼠在体瘤的抑瘤作用,因此可能成为卵巢癌基因治疗的潜在的靶点。

背景与目的Amorphigenin是从紫穗槐属植物的种子中分离提取的鱼藤酮类化合物，研究发现amorphigenin对多种肿瘤细胞具有增殖抑制作用。本研究拟探讨amorphigenin对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549／DDP的抗肿瘤作用及其可能的分子机制。方法采用CCK-8法测定A549／DDP细胞的增殖；克隆形成实验测定AS49／DDP细胞的克隆形成；流式细胞术检测细胞的凋亡率；Westernblot技术检测caspase-3、PARP和LRP蛋白的表达。结果Amorphigenin可抑制AS49／DDP细胞的增殖48h[半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentra-tion，IC50）]为（2．19±0．92）μmol／L、抑制克隆形成及诱导细胞凋亡。此外，Amorphigenin与顺铂联合可协同地抑制A549／DDP细胞生长和促进凋亡；降低耐药蛋白LRP蛋白的表达。结论Amorphigenin可抑制AS49／DDP细胞增殖和促进细胞凋亡；amorphigenin可能是通过抑制耐药蛋白LRP蛋白表达，进而与顺铂对A549／DDP细胞产生协同抑制作用。

背景与目的肺癌细胞耐药已经成为肺癌化疗的主要困难之一，异长春花碱被认为可有效抑制肺癌细胞的增殖和转移。本研究旨在探讨异长春花碱对人肺癌A549/DDP细胞顺铂耐受性的逆转作用及机制。方法1μmol/L和5μmol/L异长春花碱作用A549/DDP细胞后，应用MTS法检测肿瘤细胞顺铂敏感性的变化，应用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率变化，肿瘤细胞对Rh-123摄入量的变化，Western blot法检测MDR1、Bcl-2、survivin、caspase-3/8和PTEN蛋白表达以及Akt的磷酸化水平的变化，real-time PCR检测MDR1、Bcl-2、survivin和PTEN的mRNA表达，用报告基因系统检测NF-κB、Twist和Snail的转录活性。结果1μmol/L和5μmol/L异长春花碱作用A549/DDP细胞后，肿瘤细胞对顺铂的敏感性分别提高了1.91倍和2.54倍，肿瘤细胞对Rh-123的摄入量提高了1.93倍和2.95倍，细胞凋亡增加了2.25倍和3.82倍，MDR1、Bcl-2、survivin蛋白表达和Akt磷酸化水平下调，caspase-3/8和PTEN蛋白表达上调，MDR1的mRNA表达下调43.5%和25.8%，Bcl-2的mRNA表达下调57.3%和34.1%，survivin的mRNA表达下调37.6%和12.4%，PTEN表达上调183.4%和154.2%，NF-κB转录活性下降53.2%和34.5%，Twist转录活性下降61.4%和33.5%， Snail转录活性下降57.8%和18.7%。结论异长春花碱可提高肿瘤细胞A549/DDP对顺铂的敏感性，其机制可能与调节PTEN/AKT/NF-κB信号路径活性，进而下调耐药基因表达，上调促凋亡基因表达有关。

目的探讨重组金属蛋白酶组织抑制因子-3（rhTIMP-3）和顺铂（cis-platinum,DDP）联合应用对肺癌细胞株A549生长和凋亡的影响。方法分别或联合应用不同浓度的rhTIMP-3、DDP作用于A549细胞,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法分析细胞生长抑制作用,流式细胞术测定细胞周期分布和凋亡率。结果 rhTIMP-3与DDP均可抑制A549细胞的增殖,rhTIMP-3作用结果呈时间、浓度依赖性,DDP的作用结果呈浓度依赖性,二者都可以诱导A549细胞凋亡。rhTIMP-3使细胞阻滞在S和G2/M期,DDP可造成细胞S期的阻滞,当两者联合应用时对A549细胞的生长抑制作用明显加强,对诱导凋亡有明显协同作用。结论 rhTIMP-3、DDP均可抑制A549细胞的增殖,并可诱导其凋亡;二者联合应用不仅能增加细胞生长的抑制作用,而且有协同诱导细胞凋亡作用。

目的 探讨肿瘤转移抑制基因-1（TMSG-1）在食管鳞癌（ESCC）组织及食管癌EC109细胞中的表达及意义。方法 采用SP免疫组织化学染色法检测136例ESCC及37例正常食管黏膜组织中TMSG-1蛋白的表达情况,分析TMSG-1与ESCC患者临床病理指标的关系;培养人食管癌EC109细胞并用常用化疗药物顺铂（CDDP）干预,同时设对照组,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,半定量RT-PCR法检测细胞TMSG-1的表达情况。结果 TMSG-1在ESCC和正常食管黏膜的阳性率分别为52.2%（71/136）、94.6%（35/37）,差异具有统计学意义（P〈0.05）。TMSG-1的异常表达与ESCC组织学分级、患者的TNM分期、淋巴结转移情况相关。顺铂干预组EC109细胞的增殖抑制率较对照组显著增高,差异具有统计学意义（P〈0.01）。RT-PCR结果显示,干预组EC109细胞TMSG-1的mRNA表达明显高于对照组（P〈0.01）。结论 TMSG-1的异常表达与ESCC的发展及转移相关,可作为较为理想的肿瘤标志物辅助诊断并指导临床治疗。

目的观察洛铂（10baplatin，I．BP）或顺铂（cisplatin，DDP）分别联合依托泊苷（etoposide，VP-16）治疗广泛期小细胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）的近期疗效、不良反应和住院情况。方法46例广泛期SCLC分为DDP联合vP16的EP组23例，LBP联合VP-16的EL组23例。21d为1周期，连用2个周期评价近期疗效、毒性反应及住院情况。结果EL组和EP组比较，客观有效率、住院时间、白细胞下降率及血小板下降率，均无显著性差异。两组化疗后肺癌肿瘤标志物中神经元特异性烯醇化酶（NSE）均明显减低，但癌胚抗原（CEA）和细胞角蛋白19片段（CYFRA211）无明显减低，两组之间无显著性差异。EL组消化道反应率明显减低，但诊疗费用明显增加。结论EL和EP同样为广泛期SCLC安全有效的化疗方案，EL组消化道反应明显减少，但医疗费用明显增加。

研究表明,PI3K/AKT信号通路在非小细胞肺癌存在异常激活,对肿瘤细胞的增殖、凋亡、存活、耐药等起着重要的作用。顺铂是临床最常用一线化疗药物,但随着治疗的进展肿瘤对其耐药的现象越来越普遍,严重制约其临床效果。顺铂耐药是多种机制共同参与的复杂过程,其中PI3K/AKT通路或其组分持续被激活是非常重要的因素之一。本文对二者关系研究领域的进展作一综述。