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背景与目的 p53基因与人类多种肿瘤相关,突变型具有致癌作用,主要分布在外显子5-8。本研究旨在建立高分辨熔解曲线（high resolution melting,HRM）检测非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者p53基因突变的方法,探讨p53基因突变的特点及其在NSCLC发生发展中的演变规律。方法采用HRM法检测264例NSCLC患者肿瘤组织和54例癌旁肺组织p53基因外显子5-8的突变,突变样品进一步使用PCR产物直接测序法分析确定突变类型;HRM法检测阳性而PCR产物直接测序法检测阴性的样品,进一步进行亚克隆测序证实。结果 54例对照未发现突变。264例肿瘤组织中,HRM法检出p53基因突变104例,102例得到PCR产物直接测序法证实,突变率为39.4%;95例为点突变,7例为碱基插入和缺失导致的移码突变。p53外显子5-8的突变率分别为11.7%、8%、12.5%和10.6%,差异无统计学意义（P=0.35）。p53基因突变与性别有关,与其它临床病理特征无关。结论 HRM法筛选p53基因突变样品,具有操作简便、快速、敏感、单管避免污染等优点,值得推广。p53基因的突变特点提示,p53基因突变是自发性突变,可能是DNA合成和修复过程中的随机错误所致。

背景与目的聚集素（Clusterin,CLU）在肿瘤发生发展过程中的作用及变化特点是国内外近年来关注的一个热点,但有关CLU在肺癌中表达变化与抗癌药物敏感性机制的研究目前仍无相关报道。本研究比较CLU在Anip973与Anip973/CDDP两种细胞系中的表达,探讨CLU与非小细胞肺癌耐药关系。方法采用Western blot从蛋白水平比较CLU在Anip973和Anip973/CDDP中的差异表达,并通过流式细胞仪检测CLU与p53、Bax之间的关系。结果在蛋白水平,CLU在Anip973/CDDP中的表达都明显高于Anip973（P〈0.01）;p53在Anip973/CDDP中的表达明显高于Anip973（P〈0.01）;bax在Anip973/CDDP中的表达与Anip973相比无统计学意义（P〉0.05）。进入G0期-G1期的Anip973/CDDP耐药细胞明显多于非耐药细胞,而进入S期、G2期-M期的Anip973/CDDP耐药细胞明显少于非耐药细胞。结论CLU与NSCLC的CDDP耐药性相关;CLU、p53在Anip973/CDDP中呈异常表达,提示CLU基因和p53基因可能共同参与非小细胞肺癌耐药的发生。

背景与目的肺癌细胞的耐药性是影响化疗疗效的重要因素之一,已有的研究表明p53基因异常与肿瘤细胞耐药性的产生密切相关。本研究的目的是探讨不同状态的p53基因对人肺癌细胞系耐药性的影响,为临床选择有针对性的化疗药物提供依据。方法采用质粒pEGFP,分别构建含正义、反义p53cDNA的真核细胞表达载体,测序法检测外源p53基因。用脂质体介导转染人肺癌细胞系801D,建立含不同p53基因状态的单克隆细胞系,分别为pEGFP-801D、pEGFP-sensep53-801D[含有正义p53,pEGFP-p53（RS）-801D]、pEGFP-antisensep53-801D[含有反义p53,pEGFP-p53（AS）-801D]。荧光显微镜观察细胞绿色荧光,PCR法检测外源基因,MTT法检测耐药性,流式细胞术检测细胞周期与凋亡。结果测序结果显示外源p53基因分别以正向、反向连接于载体,荧光显微镜下转染细胞可见绿色荧光,PCR法检测出外源p53基因和neo基因。pEGFP-p53（AS）-801D细胞系对顺铂（Cisplatin,DDP）的IC50为0.26±0.09μg/mL,显著低于母系（0.55±0.19μg/mL,P〈0.05）和空载系（0.77±0.13μg/mL,P〈0.05）。pEGFP-p53（RS）-801D细胞系对DDP的IC50为0.43±0.25μg/mL,显著低于空载（P=0.000）但高于pEGFP-p53（AS）-801D（P〈0.05）。pEGFP-p53（RS）-801D细胞系对紫杉醇（Paclitaxel,TAX）的IC50为2.34±0.43ng/mL,显著低于母系（8.40±1.50ng/mL,P﹤0.05）,低于空载系但无显著差异。pEGFP-p53（RS）-801D细胞系对5氟尿嘧啶（5-Fluorouracil,5FU）的IC50为2.08±0.18μg/mL,显著低于母系（4.90±1.12μg/mL,P〈0.05）和空载系（3.41±0.86μg/mL,P〈0.05）。DDP能诱导pEGFP-p53（AS）-801D出现G2期阻滞,TAX、5FU诱导pEGFP-p53（RS）-801D细胞系分别出现G2、S期阻滞,DDP、TAX能诱导细胞凋亡和死亡。结论肺癌细胞中不同状态的p53基因对化疗药的耐药性有不同影响。p53突变、缺失与DDP耐受相关,p53缺失与TAX、5FU耐受

背量与目的 在肺癌中，p53突变是最常见的基因改变之一，p53基因的突变常导致细胞对化疗不敏感。有研究表明导入野生型p53基因能增加化疗药物的敏感性。本研究的目的是探讨重组人p53腺病毒注射液（Ad-p53，今又生，Gendicine）对人肺腺癌细胞生长及化疗敏感性的影响。方法将重组腺病毒载体所携带的野生型p53基因导入人肺腺癌细胞株GLC-82（含突变型p53基因）及A549（含野生型p53基因），并联合应用化疗药物顺铂（DDP），通过Western blot法分析外源野生型p53基因在细胞内的表达，MTT法和流式细胞术观察对细胞生长及细胞周期、凋亡的影响。结果通过Western blot证实了外源p53基因能在GLC-82及A549细胞中高效表达。MTT法观察到Ad-p53对肺癌细胞的抑制作用呈时间依赖性和剂量依赖性效应。100 MOI Ad-p53与0．5mg／LDDP联合应用后72h，对A549细胞的生长抑制率达43．13％±0．72％，显著高于单用Ad-p53组（23．44％±0．54％，P〈0.001）和DDP组（14．17％±1．39％，P〈0．001）；对GLC-82细胞生长的抑制率达63．73％±0．92％，显著高于单用Ad-p53组（41．51％±0．59％，P〈0.001）和DDP组（56．11％±1．12％，P〈0．001）。流式细胞术检测结果显示，Ad-p53与DDP联合应用能使细胞阻滞于G0-G1期，S期细胞比例明显减少。Ad-p53＋DDP组A549细胞凋亡率为28．99％±1．07％，显著高于单用Ad-p53组（15．35％±1．31％，P〈0.001）和DDP组（1．74％±0．77％，P〈0．001）；Ad-p53＋DDP组GLC-82细胞凋亡率为62．98％±2．43％，显著高于单用Ad-p53组（20．88％±0．71％，P〈0.001）和DDP组（6．91％±1．52％，P〈0.001）。结论重组人p53腺病毒注射液能抑制肺腺癌细胞的生长，并不受内源性p53状态的影响。它与抗癌药DDP联用能显著增加肺腺癌细胞的化疗敏感性。

目的利用meta分析的斤法系统评价p53 codon72多态性与官颈痛发病风险的关系。方法检索1998～2004年Medline、Elsevier、Evidence-Based Medicine Reviews、Ovid、中国期刊网、维普科技期刊数据库等，语种不限。并追溯检索获得的已发表文献及我们研究组未发表的文献。纳入标准：涉及p53 codon72基因型频率的独立病例对照研究，各文献研究方法相似，有综合的统计指标。剔除不符合纳入标准的，重复研究报告及数据不完整的文献。用RevMan4.2软件进行统汁分析。结果将总研究按病理组织学类型及种族和地域进行亚组分析，亚洲人群宫颈上皮内瘤样变（CIN）哑组和欧洲人群（主要为白种人）CIN亚组分析显示与其对照组无统计学差异。亚洲人群宫颈鳞癌（SCC）哑组合并OR=1.28，95％CI=1.05～1.55。欧洲人群SCC亚组合并OR=1.45，95％CI=1.08～1.95，P〈0.01，有统计学意义。结论p53 codon72 Arg／Arg基因型未能增加亚洲人群和欧洲人群官颈癌前期病变发生的危险性，但与浸润性宫颈癌发病风险有正向弱相关性。

背景与目的肺癌是世界上发病率和死亡率增长较快的恶性肿瘤。近几年来随着分子生物学的蓬勃发展，人们对疾病的认识达到了基因水平。通过分子生物学方法发现某一基因与肺癌之间的关联性并加以利用，为早期诊断及治疗肺癌提供了一个新的思路。本研究拟探讨p53肿瘤抑制基因BstUⅠ位点多态性与非小细胞肺癌（NSCLC）易感性及放射敏感性的相关性。方法采用PCR-RFLP方法检测50例NSCLC患者及50例健康对照p53基因序列中的BstUⅠ位点单核苷酸多态性（SNP）。并采用病例对照方法分析p53基因BstUⅠ位点的多态性与肺癌的易感性，以及NSCLC患者p53基因BstUⅠ位点的多态性与放疗疗效的相关性。结果不同p53基因BstUⅠ基因型的NSCLC患者对放疗的有效率不尽相同。杂合子（A1／A2）基因型的患者对放疗的有效率低．仅为25．0％，而纯合子（A1／A1，A2／A2）基因型的患者对放疗的有效率较高，分别为71．4％和70．0％，三者之间的差异有显著性（χ^2=9．2，P〈0．05）。肺癌组的A1／A1、A1／A2及A2／A2基因型频率分别为28．0％、32．0％及40．0％，对照组为32．0％、42．0％及26．0％，但两组间纯合子的频率差异并无统计学意义（P均〉0．05），并且未观察到p53基因BstUⅠ的多态性与NSCLC易感性有密切的相关关系。结论p53基因BstUⅠ位点多态性可能与NSCLC发生无关，但NSCLC患者的p53基因BstUⅠ SNP可能与放射敏感性有关。

目的 检测肺癌组织和支气管切缘Ｐ５３基因突变，以预测肺癌手术切除的效果和局部复发。方法 用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法，检测５０例肺癌和７例肺部良性疾病手术切除标本的支气管切缘（切缘病理无癌残留）、地组织和正常肺组织听Ｐ５３基因突变，并随访了解术后切缘癌复发与癌复发转移情况。结果 １４例（２８％）肺癌支气管切缘和２８例（５６％）肺癌组织存在Ｐ５３基因突变，正常肺组织和良性病变肺组织未发现Ｐ５３基因突变。肺

目的：探讨乙酰胆蒽（20-MC)诱导小鼠肺肿瘤发生、发展过程中cyclinD1和p53基因表达特点及其意义。方法：小鼠腹腔内注射20－MC，在不同时间段处死小鼠，得到肺部病变共292个，其中上皮增生（HP）31个，肺泡细胞腺瘤（AA）145个，乳头状腺瘤（PA）61个，乳头状腺癌（PC）55个及其复合性病变。应用免疫组化法检测各型病变中cyclinD1、p53基因蛋白表达情况。结果：cyclinD1癌基因蛋白在HP、AA、PA及PC中均有表达，分别为86％（6／7）、87％（89／102）、73％(41／56）及68％（17／25），cyclinD1癌基因蛋白在良性病变的表达强于恶性病变（x^2=5．531，P＝0．033）。p53抑癌基因蛋白表达于腺癌组织、有明显异型性的细胞、肿瘤进展较晚期，PC、PA和AA阳性率分别为40％（16／40）、9％（6／69）和3％（4／121），且分布方式不同，HP无表达。癌组织中p53基因表达明显强于各良性病变（x^2＝41．77，P＝0．000），各型病变中以PC的cyclinD1、p53基因均阳性的比率较高,为26％，HP和AA中两基因无共同表达。结论：cyclinD1基因可能参与调控肺肿瘤发生过程，而p53抑癌基因突变则与细胞增恶、肿瘤进展等有密切关系。

背景与目的核凶子κB(NFκB)参与多种肿瘤的发生发展，抑制其活性可能抑制肿瘤细胞生长。本研究旨在观察抑制NFκB对人肺癌细胞株H460生长的影响，探讨其抑制或杀伤肿瘤的分子机制。方法体外实验：用表达抑制性KB(IκBα)或LacZ的腺病毒(AdIκBα或AdLacZ)转染H460细胞，测定其生长和凋亡情况，并检测细胞培养上清液中caspase 3和TNFα表达。体内实验：用预先转染AdIκBα／AdLacZ的H460细胞建立肿瘤模型，以观察基因转染对成瘤性的影响；对未转染的H460肿瘤小鼠，于瘤内注射AdIκBα／AdLacZ／PBS，观察小鼠肿瘤的生长。留取小鼠肿瘤标本进行免疫组化染色，检测p65、p53和VEGF表达。结果①转染AdIκBα可抑制肿瘤细胞生长，促进凋亡发生；②成瘤性抑制实验显示接种30 MOI AdIκBα转染的H460细胞的小鼠中77．8％在6周内无肿瘤形成，而30 MOI AdLacZ转染组仅12．5％(P=0．012)；③对已建立的H460肿瘤，瘤内注射30 MOI AdIκBα可明显延缓肿瘤生长(P<0．05)；④免疫组化染色提示各实验组的p53表达无显著性差异，而VEGF表达在30 MOI AdIκBα转染组明显减少，转染AdIκBα抑制了H460细胞的p65活性。结论AdIκBα转染阻滞人肺癌细胞H460的NFκB活性，抑制肿瘤细胞的成瘤性，并延缓肿瘤生长。体内外实验显示AdIκBα转染不仅通过诱导凋亡而控制细胞生长，同时可下调血管形成相关基因如VEGF表达而抑制肿瘤发生发展及可能的转移。

肺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，为恶性肿瘤死亡的首要病因，对肺癌采用传统治疗包括化疗、放疗和手术方法总的生存率不到15％；另外，化疗、放疗在杀伤肿瘤细胞的同时，对正常细胞也有明显的毒性，这就需要我们发展新的治疗策略来达到治疗目的。自2004年1月世界首个基因治疗药物——重组人p53腺病毒注射液(今又生)正式在我国上市以来，肿瘤基因治疗引起全世界高度瞩目。本文就近年来重组腺病毒p53基因(Ad-p53)治疗肺癌的研究进展作一综述。