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多发性硬化症是青少年群体中最常见的神经系统疾病,目前世界上约200万患者深受其困扰,但面对此类疾病依然没有有效的治疗和干预方法。即使当前针对病理性治疗的标准治疗方案,也仅能减轻多发性硬化症的临床症状,而且存在严重的副作用。因此,寻找有效且副作用小的治疗方法迫在眉睫。动物实验以及早期临床研究业已证明间充质干细胞具有潜在的神经再生和免疫调控能力,为多发性硬化症的治疗带来了更广阔的前景。

目的探讨人输卵管内膜中是否存在干细胞,并比较输卵管内膜干细胞（FMSC）与输卵管间充质干细胞（FTMSC）的生物学特性。方法体外分离、培养及扩增人FMSC和FTMSC,比较两种干细胞的细胞形态、细胞表型、克隆形成率、增殖能力和分化能力。结果体外分离、培养及扩增的两种干细胞均呈长梭形,细胞形态相似,但与FTMSC比较,FMSC形态更为均一,有更高的细胞累积群倍数,克隆形成检测也显示其克隆形成率较高。流式细胞术检测显示两种干细胞有相似的细胞表型,体外诱导分化结果显示两者都具有成骨、成脂肪及成软骨分化能力。结论输卵管内膜层存在干细胞,且FMSC较FTMSC有更强的增殖能力,推测FMSC较FTMSC有更高的临床应用价值。

目的建立小鼠骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）铁过载（IO）模型,并对铁过载模型小鼠进行去铁及抗氧化治疗,探讨铁过载对小鼠BM-MSCs的损伤作用及活性氧（ROS）在该损伤中的作用机制。方法采用随机区组设计,将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、铁剂（右旋糖酐铁,25mg/ml）组（IO组）、铁剂＋去铁治疗（DFX,125mg/kg）组（Fe＋DFX组）、铁剂＋抗氧化治疗（NAC,40mmol/L）组（Fe＋NAC组）,每组10只。从小鼠密质骨中分离BM-MSCs培养至P1代,检测BM-MSCs内铁颗粒、不稳定铁（LIP）及ROS水平;利用倍增时间及CCK-8试剂盒检测BM-MSCs增殖情况;采用碱性磷酸酶染色（ALP）、茜素红染色、成骨分化基因检测等方法评估BM-MSCs成骨分化能力;采用油红O染色检测BM-MSCs成脂定向分化能力。结果与对照组相比,铁剂组BM-MSCs内存在明显铁颗粒,LIP及ROS水平明显增高（P〈0.05）,倍增时间明显延长（2.07±0.14d vs 1.03±0.07d,P〈0.01）。DFX组及NAC组倍增时间较铁剂组有所缩短,分别为1.52±0.07d与1.68±0.03d（P〈0.05）。与对照组比较,铁剂组BM-MSCs矿化能力及向成骨细胞分化能力下降,成骨基因ALP、RUNX2、OSN表达增强,而成脂定向分化能力增强。在去铁及抗氧化治疗后,上述改变发生部分逆转。结论铁过载可影响小鼠骨髓MSCs的增殖及定向分化能力,其机制可能与铁过载所致ROS升高有关。

目的观察脂肪间充质干细胞（AD-MSCs）输注对2型糖尿病大鼠的短期降糖效应,并初步探讨其通过肝脏糖代谢途径调控血糖的作用机制。方法 SD大鼠高脂喂养8周后腹腔单次注射小剂量链脲佐菌素（STZ,25mg/kg）建立2型糖尿病大鼠模型,输注脂肪间充质干细胞后于指定时间点（0、3、6、12、24h）尾静脉取血测定血糖,同时于相应时间点处死大鼠留取肝脏组织标本,利用Real-time q PCR和Western blotting分别检测各组大鼠肝脏组织中糖酵解过程关键限速酶[葡萄糖激酶（GK）、丙酮酸激酶（PK）、磷酸果糖激酶（PFK）]的m RNA和蛋白表达情况。结果将成功提取的脂肪间充质干细胞经尾静脉输注到2型糖尿病大鼠体内（2×106个/只）,大鼠血糖水平在短时间内明显降低,分别为30.55±1.49mmol/L（0h）、18.90±0.85mmol/L（3h）、23.70±1.13mmol/L（6h）、21.90±1.00mmol/L（12h）。PCR结果显示细胞输注后3h糖尿病大鼠肝脏组织中GK、PFK均有上调的趋势,在6h时PK明显上调（P〈0.05）。Western blotting结果显示,细胞输注后PK和GK蛋白水平在不同时间点均明显上调（P〈0.05）。结论脂肪间充质干细胞可以在短时间内有效改善2型糖尿病大鼠的高血糖状态,其机制可能是通过促进肝脏糖酵解而调节血糖水平。

目的探讨低氧培养的人脐带间充质干细胞对巨噬细胞极化的影响。方法采用组织块贴壁法获取人脐带来源的间充质干细胞（h UC-MSCs）,分别将细胞置入常氧（氧浓度21%）和低氧（氧浓度5%）条件下培养,通过细胞成脂、成骨分化诱导观察其多向分化能力,Live/death染色检测细胞活性,ELISA法检测其细胞因子蛋白含量。利用Transwell将常氧和低氧培养的h UC-MSCs与脂多糖（IPS）刺激后的巨噬细胞（THP-1）共培养,免疫荧光检测THP-1的极化情况,ELISA检测THP-1分泌炎症因子以及抗炎因子的情况。结果低氧条件下培养的h UC-MSCs具有成脂、成骨的多向分化潜能;Live/death染色结果显示常氧和低氧培养下的h UC-MSCs均具有较高的细胞活性;低氧条件下培养的h UCMSCs中前列腺素E2（PGE2）、吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）表达水平明显高于常氧培养的h UC-MSCs;低氧条件下培养的h UC-MSCs可促进THP-1向M2型巨噬细胞转化,同时炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）的表达明显降低,而抗炎因子IL-10的表达明显增强。结论低氧培养的h UC-MSCs可促使THP-1向M2巨噬细胞转化,提高其抗炎能力。

目的比较大鼠骨髓和脂肪来源的间充质干细胞在2型糖尿病中的疗效。方法 3 0只成模2型糖尿病大鼠随机分为3组：糖尿病组（T2DM,n=10）、骨髓间充质干细胞治疗组（BMSC,n=10）及脂肪间充质干细胞治疗组（ADSC,n=10）,同期正常大鼠（n=10）作为对照组。干细胞分别从正常大鼠骨髓及腹股沟脂肪组织分离培养获得。制模后和细胞注射后每日检测各组血糖。细胞注射后第7天行空腹糖耐量和胰岛素敏感性实验。胰腺组织行胰岛素/胰高血糖素免疫荧光染色。结果与T2DM组比较,干细胞注射7d后2型糖尿病大鼠的随机血糖持续缓慢下降,糖耐量及胰岛素敏感性均得以改善,胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）降低,胰岛内β细胞数量增加（P〈0.05）,但是两种类型的间充质干细胞的疗效并无显著差异。结论骨髓和脂肪来源的间充质干细胞在2型糖尿病大鼠中的疗效相当,脂肪间充质干细胞可作为2型糖尿病治疗的理想细胞。

目的 研究人脐带间充质干细胞（ucMSCs）对大鼠重症急性胰腺炎（SAP）的保护作用。方法 135只雄性SD大鼠随机分成对照组（Sham组）,SAP组和SAP＋ucMSCs组,每组45只。采用5%牛磺胆酸钠（0.1ml/100g）逆行胰管注射的方法制作大鼠SAP模型,SAP＋ucMSCs组通过尾静脉注射CM-Di I标记的ucMSCs（1×10^7个/kg）。各组于术后12、24、72h处死取材,统计大鼠死亡率,HE染色观察各组胰腺组织病理学改变并评分,荧光显微镜观察ucMSCs定植情况,ELISA法测定大鼠血清淀粉酶和脂肪酶、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）、白介素4（IL-4）和白介素10（IL-10）的表达情况。结果 ucMSCs可定植在胰腺组织的损伤区域,可降低72h SAP大鼠的死亡率（SAP组为66.7%,SAP＋ucMSCs组为20.0%）。ucMSCs移植后大鼠各时间点血清淀粉酶和脂肪酶水平明显降低（P〈0.01）,胰腺组织病理学评分、炎性因子TNF-α、IL-1β水平明显降低,抗炎因子IL-4、IL-10水平明显升高（P〈0.05或P〈0.01）。结论 人脐带间充质干细胞移植治疗可减轻重症急性胰腺炎的胰腺组织损伤和炎症程度。

目的探讨骨髓间充质干细胞条件培养基（BMSC-CM）对促炎因子诱导大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1）凋亡的影响及其作用机制。方法培养大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）至第3代,收集、浓缩其上清液,获得富含BMSCs分泌因子的条件培养基。用含促炎因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ的培养基处理INS-1细胞48h,造成炎症损伤β细胞模型,加入不同浓度的BMSC-CM继续培养12h,所获细胞分为以下5组：正常对照组,促炎因子组,1×BMSC-CM组,2×BMSC-CM组,4×BMSC-CM组。采用CCK-8法检测INS-1细胞存活率,膜连蛋白V/碘化丙啶（Annexin V/PI）检测细胞凋亡率,二氯荧光素双醋酸盐（DCFH-DA）检测细胞内活性氧（ROS）的生成量。结果与正常对照组相比,促炎因子组INS-1细胞存活率下降至正常对照组的75.84%±1.53%,细胞凋亡率增加（17.23%±1.77%）,细胞内ROS水平明显升高（34.3%±0.80%）,差异均具有统计学意义（P〈0.01）。而BMSC-CM有效对抗了促炎因子导致的INS-1细胞损伤,其作用呈剂量依赖性,4×BMSC-CM组效果最佳,该组INS-1细胞存活率较促炎因子组升高了11.86%,达到87.7%±2.08%,细胞凋亡率下降至8.67%±1.59%,ROS生成量减少至17.1%±2.14%,差异均具有统计学意义（P〈0.05）。结论 BMSC-CM可抑制促炎因子诱导的INS-1细胞凋亡,其作用机制可能与BMSC-CM降低细胞内ROS水平有关。

目的建立子宫结合带干细胞（uJZSCs）的分离培养及鉴定方法。方法将手术中无菌取得的子宫内肌层即子宫结合带用胰酶和胶原酶Ⅰ进行消化、培养、扩增。采用倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞仪进行表型分析及存活率判断,CCK-8法判断其生长特性,并在体外诱导其成脂、成骨、成软骨分化。结果所获细胞传代后能迅速贴壁,呈长梭形;流式细胞仪检测结果显示,表面标志物CD90、CD73、CD105、CD29、CD44、CD13、CD166、HLAABC呈阳性表达,而CD34、CD45、CD14、HLA-DR、CD19呈阴性表达。CCK-8生长曲线呈S形。诱导分化实验结果显示,uJZSCs具有成脂、成骨和成软骨的分化能力。结论 uJZSCs具有很强的增殖扩增能力,可作为间充质干细胞的来源。

目的观察间充质干细胞（MSCs）培养上清输注对糖尿病大鼠高血糖紊乱的治疗效果,探讨MSCs分泌产物促进胰岛再生的作用机制。方法 SD大鼠腹腔单次注射大剂量链脲佐菌素（STZ,65mg/kg）建立糖尿病大鼠模型,将诱导成功的30只糖尿病大鼠随机分为MSCs培养上清治疗组（CM,n=15）、培养基治疗组（M,n=15）,分别输注MSCs培养上清、培养基。另将15只正常大鼠作为对照组。连续治疗3d后每日测血糖,于治疗第7天测定血清胰岛素及C肽,并行腹腔糖耐量检查（IPGTT）。对动物胰腺组织标本行多重免疫荧光染色,观察MSCs上清治疗后胰岛β细胞再生情况,并进一步探究胰岛细胞再生的可能机制。结果与M组比较,治疗早期（〈7d）CM组糖尿病大鼠血糖降低,血清胰岛素及C肽含量明显增加（P〈0.05）。IPGTT结果显示,CM组较M组糖尿病大鼠胰岛功能明显增强。胰腺组织多重免疫荧光染色提示,CM组糖尿病大鼠的胰岛内β细胞数量较M组明显增加（P〈0.05）,但仍少于对照组;β细胞增殖率较M组及对照组均显著提高（P〈0.01）。结论 MSCs分泌产物通过促进胰岛β细胞增殖,促进胰腺再生,恢复胰岛功能,可用于早期糖尿病的控制与治疗。